mRNA jest szeroko stosowane w badaniach funkcji genów lub białek. W międzyczasie, jest powszechnie używane w opracowywaniu biopreparatów profilaktycznych i leczniczych. Jako wspólna strategia syntetyczna dla cząsteczek RNA, transkrypcja in vitro (IVT) umożliwia nam uzyskanie zdefiniowanych przez klienta transkryptów wydajnie.
Yaohai Bio-Pharma opracowała zestaw technologii syntezy mRNA do dostarczania wysokiej jakości RNA, takich jak projektowanie i optymalizacja sekwencji, IVT, czyszczenie, liofilizacja i otaczanie lipidowymi nanopartkami (LNP). Wszystkie produkty są wydawane na podstawie surowych standardów kontroli jakości (QC).
Wraz z wybuchem pandemii COVID-19 w 2020 roku, technologia mRNA rozwijała się w szybkim tempie, a jej powiązane badania i zastosowania uzyskały niebywały rozwój, w tym szczepionki profilaktyczne do zapobiegania chorobom zakaźnym, lecznicze szczepionki onkologiczne i leki, terapia nowotworowa, terapia zastępcza białek, medycyna regeneracyjna oraz terapia komórkowa i genowa (CGT).
wakcyna mRNA | leki oparte na mRNA |
|
Proces | Opcjonalne Usługi | Szczegóły usług | Okres dostawy (dzień roboczy) | Dostarczalność |
projektowanie i optymalizacja sekwencji mRNA | Projektowanie i optymalizacja sekwencji kodujących | Projektowanie sekwencji CDS i optymalizacja kodonów | 1-3 | Plik sekwencji |
Projektowanie i optymalizacja sekwencji niekodujących | Projektowanie i optymalizacja UTR, sekwencji polyA | |||
Przygotowanie plazmidu szablonowego transkrypcji | Przygotowanie rekombinującego plazmidu | Synteza genu | 7-10 | |
Wzmacnianie i ekstrakcja plazmidu | 4 | |||
Linearizacja i czyszczenie plazmidu | ||||
transkrypcja in vitro mRNA | Kapowanie ko-transkrypcyjne (metoda jednokrotna) | Transkrypcja in vitro (IVT) / Analog kapowy | 1-2 | N/D |
Modyfikacje nukleotydów (modyfikacje UTP/CTP) | ||||
Usunięcie szablonu DNA (DNaza I) | ||||
Zakup enzymatyczny (proces w dwóch etapach) | IVT | 2-3 | ||
Modyfikacje nukleotydów (modyfikacje UTP/CTP) | ||||
Usunięcie szablonu DNA (DNaza I) | ||||
czyszczenie mRNA (wypadek chlorku litu/magnesowe kuleczki) | ||||
Zakup enzymatyczny | ||||
czyszczenie mRNA | Klasyчczny schemat czyszczenia | Wypadek chlorku litu | 1 | substancja lekowa mRNA |
Czyszczenie magnesowymi kulami | ||||
Schemat czyszczenia kolumn chromatograficznych | Kombinacja wielu metod chromatografii | 1-2 | ||
Wymiana buforu | Ultrafiltracja | 1 | ||
liofilizacja mRNA | Liofilizacja | Wstępne zamarzanie | 2-3 | liofilizowany proszek mRNA |
Pierwsze suszenie (sublimacja) | ||||
Drugie suszenie (desorpcja) | ||||
enkapsulacja mRNA | Encapsulacja LNP | Encapsulacja LNP | 2-3 | mRNA-LNP Produkt lekarski |
Koncentracja i wymiana buforu | ||||
analiza jakości mRNA | substancja lecznicza mRNA / wyparzony proszek | Koncentracja, czystość | 1 | Raport testowy |
Integralność, efektywność zakonowania, rozkład ogona polyA | 2-5 | |||
produkt lekowy mRNA-LNP | Efektywność enkapsulacji | 1 | ||
Rozmiar cząstek i ich rozkład | ||||
Ładunek powierzchniowy | ||||
walidacja wyrażania mRNA | ocena komórek 293T | Nasadzanie komórek | 4 | |
Tymczasowa transfekcja komórkowa | ||||
Obserwacja sygnału fluorescencyjnego | 1-3 | |||
Western blot (WB) / Test ELISA (ELISA) |
kap 5' |
▪ Bez kapu ▪ Kap0, współkapowane ▪ Kap1, współkapowane ▪ Kap1, enzymatyczne zakapowanie |
5’ UTR/3’ UTR |
▪ Naturalny ciąg UTR ▪ Zmutowany/Sprawny ciąg UTR |
ogon PolyA 3' |
▪ Ogon 100A ~120A (zalecany) ▪ Podzielony ogon polyA ▪ Inne niestandardowe ogony |
Zmodyfikowane nukleozydy |
▪ Niezmodyfikowane bazy ▪ Pseudourydyna (Ψ) ▪ N1-Methylpseudourydyna (N1Ψ) ▪ 5-metylocytozyna (m5C) ▪ 5-metyluropydyna (m5U) ▪ 5-metoksuropydyna (5moU) ▪ 2-tiourydyna (s2U) ▪ 2′-O-metyluropydyna ▪ Inne modyfikacje |
Zintegrowany przepływ usług
Oferta szeregu usług, od projektowania sekwencji na etapie wstępnym po przygotowanie mRNA, kontrolę jakości i walidację wyrażania na etapie końcowym.
Projektowanie i optymalizacja sekwencji na najnowszej światowej liście
Profesjonalne projektowanie i optymalizacja sekwencji mRNA ułatwiają wydajne wyrażanie mRNA.
Zróżnicowane modyfikacje nukleotydowe
Skutecznie zwiększają wyrażanie mRNA i redukują niepożądane odpowiedzi immunologiczne na mRNA.
Dojrzała platforma oczyszczania
Dzięki połączeniu konwencjonalnej i samodzielnie zaprojektowanej metody oczyszczania, uzyskuje się próbki mRNA o wysokiej czystości.
Pełna platforma kontroli jakości
Wzbogacenie opcji kontroli jakości w celu spełnienia wymagań testów rutynowych, takich jak stężenie, czystość A260/280 i integralność, oraz wysokie wymagania dotyczące kontroli jakości, takie jak efektywność zakonkowienia/podział polyA.
Szybka dostawa
Dostarczanie zamiennego mRNA może zajmować do 7 dni, z wyjątkiem zewnętrznej syntezy sekwencji.