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Purification du circRNA basée sur l'HPLC

L'ARN circulaire, ou circRNA, est un type spécifique d'ARN qui a une forme différente. Alors que l'ARN normal a une apparence en ligne droite, le circRNA est en boucle. Les circARNs, dont la structure est cruciale car ils se révèlent souvent abondants et participent à de nombreux processus cellulaires importants. D'une part, ils régulent l'expression de nos gènes, ce qui peut influencer tout, des modèles de croissance de notre corps à notre réponse aux maladies. Les circARNs intéressent beaucoup les scientifiques ; une meilleure compréhension d'eux peut révéler comment les maladies se développent et identifier de nouvelles approches thérapeutiques. Mais il y a un problème : les circARNs sont très petits et tendent à être présents en très faibles quantités dans les échantillons étudiés par les scientifiques. Cela rend difficile de récolter assez de circRNA pour la recherche.

Avant que la fondation définitive ne soit établie pour collecter les circRNA, une méthode bien établie appelée Chromatographie en phase liquide à haute performance, ou HPLC en abrégé, a été utilisée. L'HPLC est une technique polyvalente utilisée pour séparer diverses molécules en fonction de leurs caractéristiques physiques et chimiques. Elle fonctionne en séparant les molécules en fonction de leur taille et de leur forme. Comme les circRNA sont très petits, ils peuvent facilement se perdre parmi les milliers d'autres molécules présentes dans un échantillon. Cela signifie que les circRNA peuvent être séparés des autres ARN, protéines et débris exogènes qui pourraient être inclus dans l'échantillon en utilisant des méthodes efficaces telles que la chromatographie d'exclusion stérique (SEC), une technique d'HPLC. C'est une séparation importante pour les scientifiques qui ont besoin d'isoler les circRNA pour leurs recherches.

Isolation de circRNA basée sur l'HPLC pour une analyse downstream précise

Une fois que l'HPLC aide à la purification de la circRNA, elle doit être analysée en profondeur par des scientifiques pour comprendre ses fonctions chez nous. Les circARN sont apparus comme des molécules importantes impliquées dans de nombreuses fonctions biologiques, rendant une compréhension approfondie des différents types et rôles de circARN critique pour décrypter leur implication dans diverses maladies. Les scientifiques ne connaissent pas la séquence de la circRNA purifiée et devront la découvrir pour élucider les fonctions de ces rôles. Pour cela, ils utilisent des techniques telles que la PCR inverse (RT-PCR). Avec la RT-PCR, les scientifiques produisent des copies supplémentaires de la circRNA afin de pouvoir l'étudier plus spécifiquement. Elles sont souvent informatives, fournissant des informations sur le fonctionnement de ces molécules et leur rôle dans nos cellules, en analysant les séquences de circRNA.

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