Щодо масового виробництва mRNA, транскрипція in vitro (IVT) є більш ефективним і вдосконалим методом. Реакція IVT використовує лінійний плазмідний DNA, що містить T7 промотор як шаблон, а mRNA синтезується з нуклеозидних трифосфатів (NTPs) як субстратів у наявності T7 RNA полімерази.
Модифікація нуклеотидів є переломним моментом у дослідженні mRNA, де немодифіковані молекули mRNA розпізнаються інтерклітичними сенсорами RNA для активації вродженої імунітетності. З огляду на імуногенність mRNA in vivo та ефективність перекладу, процес IVT зазвичай використовує певні види модифікованих НТП, а поширені модифіковані нуклеотиди - це псевдouriidine (Ψ), N1-метил-псевдouriidine (N1Ψ) та 5-метилцитозин (5mC).
Процес транскрипції mRNA in vitro
Діаграма реакції транскрипції in vitro (IVT)
Деталі послуг
Опціональні послуги |
Деталі послуги |
Термін доставки (робочий день) |
Транскрипція in vitro (IVT) |
IVT, транскрипція in vitro |
1 |
| Модифікації нуклеотидів (Ψ/ N1Ψ/ 5mC тощо) |
| Видалення шаблону DNA (DNase I) |
Оптимізація умов IVT - опціонально |
Проектування та оптимізація компонентів реакції IVT |
2-5 |
Наші особливості
- Розмаїтні стратегії модифікації нуклеотидів
Покращення стійкості mRNA та виразки белка in vivo.
- Строгий проект тесту та його оптимізація
підготовка фрагмента mRNA до 10kb може бути здійснена.
Шляхом оптимізації умов реакції IVT швидкість транскрипції досягає 1:200.
Суворий контроль RNase через експериментальну середовищу та витратні матеріали може ефективно запобігати деградації mRNA.
Вивчення випадку
Поточна система реакції IVT приблизно оптимізована для синтетичних систем довжиною близько 100 нт, а не для mRNA довільної довжини. Чим більша довжина mRNA, тим складніше її транскрибувати та тем більша її підкладність до деградації.
Щоб підготувати індивідуалізовані mRNA секвенції довжиною приблизно 10 кб, компанія Yaohai Bio-Pharma успішно підготувала високоякісні зразки з високим співвідношенням транскрипції 1:135 і отримала 135 μg початково очищених mRNA продуктів після транскрипції 1 μg лінеаризованого плазміди в vitro шляхом строгого експериментального проектування, неперервної оптимізації умов реакції та строгого контролю RNase.
ідентифікація mRNA (агарозна гелевая електрофорез)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
