Что касается массового производства mRNA, транскрипция in vitro (IVT) является более эффективным и зрелым методом. Реакция IVT использует линеаризованный плазмидный ДНК, содержащий промотор T7, в качестве шаблона, а mRNA синтезируется с использованием нуклеозидных трифосфатов (NTP) как субстратов в присутствии полимеразы РНК T7.
Модификация нуклеотидов является прорывом в исследовании mRNA, где немодифицированные молекулы mRNA распознаются внутриклеточными датчиками РНК для активации врожденного иммунитета. Учитывая иммуногенность mRNA in vivo и эффективность трансляции, процесс IVT обычно использует определенные виды модифицированных NTP, а распространенные модифицированные нуклеотиды — это псевдouriдин (Ψ), N1-метил-псевдouriдин (N1Ψ) и 5-метилцитозин (5mC).
Процесс транскрипции in vitro для mRNA
Схема реакции транскрипции in vitro (IVT)
Детали услуг
Необязательные услуги |
Детали услуги |
Срок доставки (рабочий день) |
Транскрипция in vitro (IVT) |
IVT, Транскрипция in vitro |
1 |
| Модификации нуклеотидов (Ψ/N1Ψ/5mC и т.д.) |
| Удаление шаблона ДНК (ДНаза I) |
Оптимизация условий IVT - опция |
Проектирование и оптимизация компонентов реакции IVT |
2-5 |
Наши особенности
- Разнообразные стратегии модификации нуклеотидов
Повышение стабильности mRNA и экспрессии белка in vivo.
- Строгий дизайн и оптимизация тестов
подготовка фрагментов mRNA до 10 кб возможна.
При оптимизации условий реакции IVT скорость транскрипции может достигать до 1:200.
Строгий контроль РНазы через экспериментальную среду и расходные материалы может эффективно предотвратить деградацию мРНК.
Изучение кейса
Текущая система реакции IVT в основном оптимизирована для синтетических систем длиной около 100 нт, а не для мРНК произвольной длины. Чем длиннее последовательность мРНК, тем сложнее её транскрибировать и тем больше вероятность её деградации.
Для подготовки индивидуальных последовательностей мРНК длиной около 10 кб компания Yaohai Bio-Pharma успешно приготовила высококачественные образцы с высоким коэффициентом транскрипции 1:135 и получила 135 мкг первично очищенных продуктов мРНК после транскрипции in vitro 1 мкг линеаризованного плазмида благодаря строгому экспериментальному проектированию, непрерывной оптимизации условий реакции и строгому контролю РНазы.
идентификация мРНК (агарозный гель-электрофорез)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
