Danes je Yaohai zelo vesel, da lahko deli svoj protokol za transkripcijo v testnu cevico dolgih RNA. To je učinkovita strategija, ki jo znanstveniki pogosto uporabljajo za proizvodnjo RNA v laboratoriju. Na ta način lahko raziskovalci proizvedejo značilno večje količine dolgih RNA — nekaj, kar je ključno za študij v različnih bioloških področjih. Tukaj ponujamo korak za korakom opis priprave dolgih RNA prek transkripcije v testni cevico. Prav tako bomo govorili o tem, kako lahko izboljšamo ta postopek in poskušali rešiti nekatere probleme, s katerimi se srečujete pri sintetični proizvodnji dolgih RNA.
Za transkripcijo v testni cevico, posebej dolge RNA, potrebujete nekaj ključnih sestavin. Morate imeti na voljo enzim, imenovan RNA polimeraza, pismo material v obliki nukleotidnih trifosfatov (NTPs), bufer, ki pomaga pri reakciji, ter kakšen DNA predložek. Kako to storiti korak za korakom, lahko najdete podrobno navodila tukaj:
Nekaj faktorjev je zelo pomembnih za dobro delovanje sinteze RNA. Najpomembneje je količina magnezijevih ionov v samem buferju. RNA polimeraza zahteva veliko magnezija za pravilno interakcijo s DNA predlogom in nadaljnjo zlaganje RNA. Druga pomembna razlika, ki jo je potrebno upoštevati, je koncentracija DNA predloga. Konkretno morate imeti dovolj predloga DNA za reakcijo, da boste dosegli dobre izdelke RNA.
Dolg RNA seveda s seboj prinese svojo množico problemov. Ti problemi lahko zadevajo razgradnjo RNA, vplivajo na to, kako se RNA stegne, ter ustvarjajo strukture, ki morebiti ovirajo sintezo RNA. Eden način, kako obravnavati te izzive, je prilagoditev buffera, ki ga uporabite. Za bolj kompleksno strukturo RNA lahko raziskovalci dodajajo različne posebne kemikalije, kot so DTT in p-merkaptetanol, da pomagajo RNA, da se pravilno stene, in jo preprečijo, da se lepi skupaj ali skupno.
Prav tako niso vsi dolgi tipi RNA enaki in nekateri morda zahtevajo alternativne metode sinteze. Obstajajo posebne značilnosti, ki jih raziskovalci morda želijo dodati v RNA, kot je dodajanje 5' kapove ali Poly-A repa. Če je to potrebno (kot je pojasnjeno kasneje), morajo raziskovalci vključiti druge enzyme, kot so Guanylyltransferaza in Poly(A) Polymeraza. Prav tako mora biti izbran primeren RNA polymeraza, ki im natavo omogoča proizvodnjo več RNA. Ko je treba sintetizirati dolgo RNA, moramo določiti najboljše pogoje.
Dolgi transkript RNA in vitro. Obstaja številna ključna uporaba protokola dolgega transkripta RNA in vitro v več raziskovalnih, testnih in terapevtskih posredovanjih. Pomaga znanstvenikom razumeti strukturo RNA, način njegove delovanja in kako lahko spremenijo gene s sodobnimi tehnologijami. Vsak dan se odkrivajo nove bolezni in njihove terapije, kot so trenutne RNA terapije, kar nam pokaže, kako uporaben je ta branjenje-v-tehnologija za medicino.
Uporaba tega protokola ponuja veliko prednosti. Metoda z osnovno elektroforezo je splošno najučinkovitejši in najbolj ekonomičen način, da se proizvede velike količine dolgega RNA. Poleg kakovosti RNA je tudi dober iznos pomemben dejavnik za raziskovalce, ki jim pomaga pri njihovi raziskavi, še posebej če potrebujejo velike količine RNA za poskuse zaradi visoke količine vhodnega materiala, s katerim začnejo. Vseeno pa je transkripcija v vitro za dolge RNA tipično točnejša in ponovljivejša kot kemikalna sinteza ali celična sinteza RNA.
Yaohai BioPharma je med desetimi najboljšimi mikrobiološkimi CDMO, ki vključujejo protokol in vitro transkripcije za dolge RNA ter regulativne zadeve. Imamo sistem upravljanja kakovosti, ki je v skladu s trenutnimi GMP standardi ter globalnimi regulacijami. Naša ekipa strokovnjakov za regulativne zadeve je izkušena v globalnih regulativnih okvihrih, da pospeši izida bioloških proizvodov. Garantiramo sledljive proizvodne postopke, kvalitetne produkte ter poštivanje pravil US FDA in EU EMA. Avstralija TGA in Kitajska NMPA sta tudi zadovoljni. Yaohai BioPharma je uspešno prešla pregled na lokaciji Evropske unije Kvalificiranega oseba (QP) za naš sistem kakovosti GMP ter naše proizvodne obiske. Poleg tega smo uspešno zaključili prve certifikacijske pregledave Sistemu upravljanja kakovosti ISO9001, Sistemu upravljanja okolja ISO14001 in Sistemu upravljanja varnosti in zdravja delavcev ISO45001.
Yaohai Bio-Pharma, med desetimi največjimi proizvajalci bioloških izdelkov, je strokovnjak v oblasti mikrobijske fermentacije. Ustvarili smo napredno namestitvo, opremljeno z sodobnimi sredstvi in močnimi zmogljivostmi raziskovanja in razvoja (RD) ter proizvodnje. Imamo pet proizvodnih linij snovi za lekarstva, ki ustrezajo zahteve GMP za mikrobijsko fermentacijo in očiščevanje, ter dve avtomatizirani liniji za naklanjanje v kartuše, steklene cevnike in prednapolnjene špance. Fermentacijske kapacitete so na voljo od 100L do 500L, 1000L in 2000L. Protokol transkripcije v vitro za dolge RNA variira med 1 ml in 25 ml, medtem ko so specifikacije za prednapolnjene špance in kartuše v obsegu od 1-3 ml. Naša proizvodna delavnica je cGMP-skrbnika in zagotavlja stabilno ponudbo kliničnih vzorcev ter tržnih izdelkov. Naša zaklada proizvaja velike molekule, ki jih distribuira po svetu.
Yaohai Bio-Pharma ima izkušnje v proizvodnji bioloških sredstev, ki jih ustvarjamo iz mikroorganizmov. Ponujamo prilagojene RD rešitve ter storitve proizvodnje, pri čemer minimiziramo morebitne tveganja. Sodelovali smo z različnimi tehnikami, kot so rekombinantni celinsko podrejeni deli, cebelice (vključno s peptidoma), rastni faktorji, hormoni in Protokol za transkripcijo in vitro za dolgo RNA. Specializiramo se na mnoge mikroorganizme, kot so plodne sekretacije ekstracelularno in intracelularno kvasov (do 15g/L) ter bakterijske intracelularne rešljive oblike in inkluzijske telesa (do 10g/L). Razvili smo tudi platformo za fermentacijo BSL-2 za izdelavo bakterijskih cebelic. Imamo zgodovino izboljšanja procesov proizvodnje, kar povečuje izdelke in zmanjšuje stroške. Vrsta visoke učinkovitosti našega tehnološkega tima zagotavlja časovno in visoko kakovostno izvajanje projektov. To nam pomaga prinesiti vaše edinstvene produkte hitreje na trg.
Yaohai Bio-Pharma je vodilna pri izdelavi protokola za in vitro transkripcijo dolgih RNA v CDMO. Naše glavno pozornost smo posvečali proizvodnji mikrobijskih cepiv in terapij za obdelovanje živali, človeškega in veterinarskega zdravja. V naši razpolaganju so najnovejše Raziškave in razvoj (RD) ter tehnološke platforme za proizvodnjo, ki pokrivajo celoten proces proizvodnje od inženiringa mikrobijskih štrank, obdelave bančnih celic in načrtovanja metod do klinične in trgovinske proizvodnje, s katerimi zagotavljamo uspešno dostavo najnaprednejših rešitev. Zbiramo ogromno znanja v področju bioprocesiranja mikrobov. Več kot 200 projektov je bilo uspešno zaključenih in pomagamo našim strankam, da se prilagajajo predpisom, kot so tisti ameriške FDA ter evropske EMA. Pomagamo jim tudi v sodelovanju z australsko TGA in kitajsko NMPA. Zaradi našega izkušenja in strokovnih znanj lahko hitro odzivamo na tržne zahteve in ponujamo prilagojene storitve CDMO.