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HPLC-basierte circRNA-Reinigung

Zirkuläres RNA, oder circRNA, ist eine spezifische Art von RNA, die eine andere Form hat. Während normale RNA eine lineare, geradlinige Erscheinung aufweist, ist circRNA geschlungen. Die Struktur der CircRNAs ist entscheidend, da sie oft in großer Menge vorhanden sind und in vielen wichtigen zellulären Prozessen beteiligt sind. Sie regulieren unter anderem, wie unsere Gene exprimiert werden, was alles von den Wachstumsmustern unseres Körpers bis hin zu unserer Reaktion auf Krankheiten beeinflussen kann. CircRNAs wecken großes Interesse bei Wissenschaftlern; ein besseres Verständnis von ihnen kann Aufschlüsse über die Entstehung von Krankheiten geben und innovative therapeutische Ansätze identifizieren. Es gibt jedoch ein Problem: CircRNAs sind sehr klein und neigen dazu, in sehr geringen Mengen in den von Wissenschaftlern untersuchten Proben vorhanden zu sein. Dies macht es schwierig, genügend circRNA für Forschungszwecke zu gewinnen.

Bevor die endgültige Grundlage geschaffen wurde, um circRNA zu sammeln, wurde eine etablierte Methode namens Hochleistungsflüssigkeitschromatographie, kurz HPLC, eingesetzt. HPLC ist eine vielseitige Technik, die zur Trennung verschiedener Moleküle nach ihren physikalischen und chemischen Eigenschaften verwendet wird. Sie funktioniert dadurch, dass sie Moleküle aufgrund ihrer Größe und Form trennt. Da circRNAs sehr klein sind, können sie leicht unter den tausenden anderen Molekülen in einem Probe verloren gehen. Das bedeutet, circRNAs können von anderen RNAs, Proteinen und fremden Verunreinigungen, die eventuell in der Probe enthalten sind, durch effektive Methoden wie Größenexklusionschromatographie (SEC), einer HPLC-Methode, getrennt werden. Es ist eine wichtige Trennung für Wissenschaftler, die circRNA für ihre Forschung isolieren müssen.

HPLC-basierte circRNA-Isolierung für genaue nachgelagerte Analyse

Sobald HPLC bei der Reinigung von circRNA hilft, muss sie gründlich von Wissenschaftlern analysiert werden, um ihre Funktionen in uns zu verstehen. CircRNAs sind als wichtige Moleküle aufgetreten, die an verschiedenen biologischen Funktionen beteiligt sind, was ein tiefgehendes Verständnis der verschiedenen circRNA-Typen und -Rollen für die Entschlüsselung ihrer Beteiligung an diversen Krankheiten kritisch macht. Wissenschaftler kennen die Sequenz der gereinigten circRNA nicht und müssen es herausfinden, um die Funktionen dieser Rollen zu entdecken. Dazu nutzen sie Techniken wie die Umkehrtranskription PCR (RT-PCR). Mit RT-PCR erstellen Wissenschaftler weitere Kopien der circRNA, damit sie sie spezifischer untersuchen können. Sie sind oft aufschlussreich und liefern Informationen darüber, wie diese Moleküle funktionieren und was sie in unseren Zellen tun, indem sie die circRNA-Sequenzen analysieren.

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