Proizvodnja rekombinantnih beljakovin: inženirane vrste E. coli

Escherichia coli (E. coli) je v biofarmacevski industriji igrala pomembno vlogo pri proizvodnji rekombinantnih beležin, saj je služila kot prva izraževalna vektorska platforma za proizvodnjo biološkega zdravila. E. coli se glasno razvija, omogoča enostavno genetsko manipulacijo in hitro sintetizira rekombinantne beležine, med drugim pa tudi druge prednosti. Obsežne spremembe so naredile E. coli optimalen izbor za izražanje beležin, kar je pripeljal do oblikovanja različnih inženirskih števil E. coli.

Yaohai Bio-Pharma se specializira na ponujanju uslužnih storitev po meri za fermentacijo, očiščevanje, razvoj formulacije in proizvodnjo vrste biologičnih farmacevtskih sredstev, ki jih izražajo sistemi E. coli. Glede na obsežno izkušnjo Yaohai smo povzeli, da se uporabljajo štiri pogostejše vrste E. coli za proizvodnjo rekombinantnih beležin ter njihove lastnosti.

BL 21 vrsta

Porožena iz linije E. coli B, vrsta BL21 pomanjka proteaza Lon in zunanje membranske proteaze OmpT. Proteaza Lon glavno razgrinja tuje proteine, medtem ko OmpT glavno razgrinja proteine ekstracelularne matrikse. Pomanjkanje teh dveh ključnih proteaz lahko učinkovito prepreči razgradnjo rekombinantnih proteinov.

Vrsta Origami

Vrsta Origami, odvodnik E. coli K-12, vsebuje mutacije v tiredoxin reduktazi in glutatyon reduktazi, ki omogočajo oblikovanje pravilno zloženih proteinov s disulfidnimi vezami in povečuje raztopljivost proteinov. Vrsti Origami, vključno s Origami, Origami 2 in Origami B, so primerni za izražanje aktivnih proteinov s disulfidnimi vezami.

Vrsta SHuffle

SHuffle cepa konstitutivno izraža izomer disulfidnih vezi DsbC v citozemu, kar spodbuja oblikovanje pravilnih disulfidnih vez v oksidiranih белkah. Služi tudi kot molekularni čaperon za zlaganje beljakovin, s katerim se pomaga pri oblikovanju pravilne konformacije.

Rosetta cepa

Cepa Rosetta dopolnjuje E. coli s tRNA, ki odgovarjajo redkim kodonom, s ciljem izboljšati ravno izražanje tujskih genov, posebej eukariotskih genov, v prokarionskih sistemih. Porožena iz BL21 in nosi plazmid pRARE, ki je oduporen kloramfenikolu, s katerim dopolnjuje šest tRNA, ki odgovarja redkim kodonom (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC in GGA), ki jih prvotno ni bilo v E. coli, tako da omogoča boljšo "univerzalno" sintezo beljakovin.

Zaključek

Tri glavne faktorje za uspešno proizvodnjo rekombinantnih beljakovin so nosilec, vektor in pogoji kulture. Na podlagi razumevanja fizikalno-kemijskih lastnosti rekombinantne beljakovine, posebnih prednosti vsakega štrika ter posebnih potreb poskusa je treba izbrati najprimernejšega nosilca. Poleg tega je treba optimizirati faktorje, kot so plazmidni vektorji, temperatura in induktorji, da se poveča izrazitev beljakovine.

Yaohai Bio-Pharma aktivno išče tudi institucionalne ali posamezne globalne partnerje in ponuja najbolj konkurenčno nakazilo v industriji. Če imate katere koli vprašanje, prosimo, da nas kontaktirate: [email protected]