Rekombinantné proteíny často ukazujú oxidáciu expozovaných bočných reťazcov aminokyselín, ako sú tryptofán (Trp) a methionín (Met), čo zmení fyzikálno-chémické vlastnosti proteínov. Tieto zmeny môžu spôsobiť úpravu biologických funkcií dotknutých proteínov, ako je strata väzby, zníženie enzymatickej aktivity, neočakávané rýchle odstránenie. Proteíny sú dôležitými cieľmi pre oxidatívne reakcie, pretože reagujú rýchlo s oxidantmi a sú hojne predstavené v bunkách, extracelulárnych tkanivách a telových tekutinách.
Preto je monitorovanie oxidácie proteínov kritické pre úspešný vývoj biopharmaceutických liečiv.
Yaohai Bio-Pharma ponúka službu analýzy oxidácie aminokyselín, ktorá Vám umožňuje určiť oxidáciu aminokyselín pomocou kapalinovej chromatografie – hmotnostnej spektrometrie (LC-MS).
Boli sme zapojení do charakterizácie štruktúry bílkovín rôznych veľkých molekúl, vrátane rekombinantných subunitných vakcín, nanotiaľov / VHHs / jednodoménových antitela (sdAbs), fragmentov antitela, hormónov/peptidov, cytokínov, rastových faktorov (GF), enzymov, kolagénov atď.
Regulačné požiadavky na oxidáciu aminokyselín
Podľa smerníc ICH Q6B môžu byť oxidované formy detekované a charakterizované chromatografickými, elektroforetickými a/alebo inými príslušnými analytickými metódami (napr. vysoko výkonná kapalinová chromatografia (HPLC), kapilárna elektroforezia, hmotnostná spektrometria, kruhová dichroismus).
Analytické metódy
| Analýza |
Metódy |
| Oxidácia aminokyselín |
LC-MS, reverznofázova vysoko výkonná kapalinová chromatografia (RP-HPLC) alebo hydrofobná interakčná chromatografia vysoko výkonnej kapalinovej chromatografie (HIC-HPLC) a hmotnostná spektrometria |
Analytické postupy
1. Príprava vzoriek
2. LC-MS
3. Analýza údajov
Reziduá tryptofánu (Trp) sú obzvlášť náchylné k oxidácii kvôli vysoké reaktivite aromatného indolu s reaktívnymi formami kyslíka. Oxidácia Trp vyžaduje isté vystavenie Trp reziduov, ktoré sú bežne zakopané v trojrozmernom štruktúre proteínu.
Však keď sa Trp reziduá oxidujú, môžu sa premeniť na množstvo produktov s veľmi odlišnými vlastnosťami od pôvodného Trp. Najbežnejšia cesta pre oxidáciu Trp zahŕňa tvorbu N-formylkinurénu (Rozdiel v hmotnosti: +32).
Ďalším často oxidovaným aminokyselinovým reziduom je methionín. Sulfánový atom v Met reziduoch môže prijať buď jeden alebo dva atómy kyslíka, čo viede k tvorbe sulfoxidu (Rozdiel v hmotnosti: +16) alebo sulfónu (Rozdiel v hmotnosti: +32), príslušne. Táto modifikácia je relatívne bežná kvôli typicky vysokému povrchovému vystaveniu Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
