Šiandien Yaohai yra taip patogu dalintis savo in vitro transkripcijos protokolu ilgoms RNA. Tai yra efektyva strategija, kurią mokslininkai dažnai naudoja norint gauti RNA laboratorijoje. Šiuo būdu tyrimų specialistai gali gaminti didelį ilgųjų RNA kiekį – kažką, kas yra būtina skirtingų biologinių sričių tyrime. čia mes pateikiamas žingsnis po žingsnio vadovą ilgųjų RNA paruošimui per in vitro transkripciją. Taip pat aptarsime, kaip galima geriau atlikti procesą ir bandysime išspręsti kai kurias problemas, su kuriomis susiduriat sintezuojant ilgas RNA.
In vitro transkripcijai, ypač ilgiems RNA, reikalingi kelios esminės komponentos. Turėsite pateikti enzymą, vadinamą RNA polimeraze, rašymo medžiagą rūšiuose trifosfato nukleotidams (NTP), buferį reakcijai padėti, bei kai kurį DNA šabloną. Kaip tai padaryti žingsnis po žingsnio, detalųjį vadovą rasite čia:
Keli veiksniai yra labai svarbūs gerai veikiančiam RNA sintezės procesui. Ypač vertinga yra magnio jonų kiekis patys buferis. RNA polimerazai reikalauja didelio magnio kiekybės, kad tinkamai sąveiktų su DNA šablonu ir užtikrintų geresnę RNA sudvigimą. Antras svarbus aspektas, kurį reikia įvertinti, yra DNA šablono koncentracija. Konkrečiai, turite turėti pakankamai šablono DNA reakcijai, kad gautumėte geresnius RNA produktais.
Ilgas RNA, žinoma, atsiras su savo rinkinio problemomis. Šios kliūstys gali susiję su RNA skilimu, paveikti tai, kaip RNA suklampuoja, bei sukurti struktūras, kurios galėtų trukdyti RNA sintezėj. Vienas iš būdų spręsti šias problemas yra keisti naudojamą buferį. Norint gauti sudėtingesnę RNA struktūrą, tyrinėtojai gali pridėti įvairius specialiuosius cheminėlius medžiagas, tokius kaip DTT ir p-merkaptoetanolas, kad padėtų RNA teisingai suklampyti ir užkirsti kelią jos susipjovimui ar susipjovimui.
Be to, ne visi ilgi RNA tipai yra vienodi, ir kai kurie gali reikalauti kitokio sintezės metodo. Yra specialiųjų bruožų, kuriuos mokslininkams gali būti reikalinga įdėti į RNA, pvz., pridėti 5 kapą arba Poly-A uodega. Jei tai reikalinga (kaip paaiškinta vėliau), mokslininkams reikia įtraukti kitus enzymus, tokius kaip Guanylyltransferase ir Poly(A) Polymerase. Taip pat reikia pasirinkti tinkamą RNA polimerazę, kurios gamyba natūraliai leidžia joms gaminti daugiau RNA. Kai ilgą RNA reikia sintezuoti, mums reikia nustatyti optimalias sąlygas.
Ilgų RNA in vitro transkripcijos protokolas turi kelis svarbius panaudojimus įvairiose tyrimo, analizės ir terapijos srityse. Jis padeda mokslininkams suprasti RNA struktūrą, jos veikimo būdą ir tai, kaip jie gali modifikuoti genus su šiuolaikinėmis technologijomis. Kiekvieną dieną atskleidžiame naujas ligas ir jų terapijas, pvz., labai aktualias RNA terapijas, kurios parodo, kiek naudinga ši technologija medicinos srityje.
Naudojant šį protokolą, yra daug privalumų. Elektroforezės pagrindu veikiamas metodas yra bendrai efektyviausias ir ekonomiškesnis būdas gaminti didelius ilgo RNA kiekius. Šalia RNA kokybės, geras grąžos dydis taip pat yra svarbus mokslininkų veiklos aspektas, ypač jei jie reikalauja didelių RNA kiekių eksperimentams dėl aukšto pradžios medžiagos tūrio. Be to, in vitro transkripcija ilgajam RNA yra paprastai tiksliau ir pakartojamesniu nei cheminis sintezė ar klėtiniškas RNA sintezė.
Yaohai BioPharma yra viena iš 10 geriausių mikrobiologinių CDMO, kuri įtraukia In vitro transkripcijos protokolą ilgoms RNA bei reguliavimo reikalavimus. Turime kokybės valdymo sistemą, atitinkančią dabartiniausias GMP standartus ir pasaulio reguliavimo normas. Mūsų reguliavimo ekspertų komanda gali gerai suprasti pasaulinius reguliavimo modelius, kad przispartintų biologinių produktų paleidimą. Mes užtikriname sekamą gamybos procesų kokybę bei laikomės JAV FDA ir ES EMA taisyklių. Australijos TGA ir Kinijos NMPA taip pat yra patenkintos. Yaohai BioPharma sėkmingai praeitų Europos Sąjungos Kvalifikuoto Asmens (QP) audito dėl mūsų GMP kokybės sistemos ir gamybos įstaigos. Be to, mes sėkmingai praejomės pirmuosius ISO9001 kokybės valdymo sistemos, ISO14001 aplinkosaugos valdymo sistemos ir ISO45001 darbo saugumo ir sveikatos valdymo sistemos sertifikavimo auditus.
Yaohai Bio-Pharma, vienas iš dešimties geriausių biologinių produktų gamintojų, yra specialistas mikrobių fermentacijai. Mes sukūrėme pažangias įrangą, kurioje yra modernios įrenginio ir stiprios RD gamybos galimybės. Turime penkis vaistų medžiagos gamybos linijas, atitinkančias GMP reikalavimus mikrobių fermentacijai ir šalinimui, bei du automatizuotos užpildymo linijos kartridžiams, buteliams ir priešužpildytoms injekcijų aisčių. Fermentacijos mastai kinta nuo 100L iki 500L, 1000L ir 2000L. In vitro transkripcijos protokolas ilgiems RNA vamzdynams yra nuo 1ml iki 25ml, o priešužpildytų aisčių ir kartridžių užpildymo specifikacijos apima 1-3ml. Mūsų gamybos darželis yra cGMP atitinkamas ir užtikrina stabilų klinikinių imtinių ir komercinių prekių tiekimą. Mūsų fabrika gamina didelius molekulės, kurios siunčiamos visame pasaulyje.
Yaohai Bio-Pharma turi patirties gamindami biologinius produktus, kurie yra sukurti iš mikroorganizmų. Siūlome pasirinktinius tyrimo ir vystymosi sprendimus bei gamybos paslaugas, mažindami galimus rizikas. Dirbome su įvairiomis technologijomis, tokiais kaip rekombinantiniai ląstelės subdaliniai, vakcinos (įskaitant peptidus), augimo veiksnius, hormonus ir In vitro Transkripcijos Protokolą ilgoms RNA. Yra specializuota į daugelį mikroorganizmų, pavyzdžiui, gėlių eksterninę ir interninę sekreciją (iki 15 g/L) bei bakterijų interninę tirpalumą ir inkluzijų kūną (iki 10 g/L). Taip pat sukūrėme BSL-2 fermentacijos platformą, kad sukurtume bakterines vakcinas. Turime patirtį tobulinti gamybos procesus, padidindami grąžą ir sumažindami išlaidas. Mes turime aukščiai efektyvų technologijų komandą, kad užtikrintume laiku ir aukštos kokybės projektų pateikimą. Tai padeda mums greičiau pristatyti jūsų unikalius produktus rinkoje.
Yaohai Bio-Pharma yra vamzdinėje padėtyje in vitro transkripcijos protokolo srityje ilgųjų RNA CDMO. Pagrindinis mūsų dėmesys buvo sutelktas į mikrobinių vakcinų ir terapijų gamybą, skirtas gyvūnams, žmonėms ir veterinarijai. Mes turime modernias tyrimo ir plėtros (RD) bei gamybos technologijų platformas, kurios apima visą gamybos procesą – nuo mikroorganizmų šeimininkų inžinerijos iki ląstelių banko apdorojimo, metoduose projektavimo iki klinikinės ir komercinės gamybos, užtikrinant, kad galėtume sėkmingai pateikti labiausiai pažangesnius sprendimus. Mes susirinkome didelį mikrobiologinių procesų žinių kiekį. Sėkmingai baigta daugiau nei 200 projektų, o mes padedame savo klientams laikytis reguliavimo normų, pvz., JAV FDA bei ES EMA reikalavimų. Taip pat jiegiame juos naviguoti Australijos TGA ir Kinijos NMPA srityse. Dėl mūsų patirties ir specialistų, mes gebame greitai atsakyti į rinkos poreikius ir siūlyti individualizuotus CDMO paslaugas.