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Purificazione di circRNA basata su HPLC

L'RNA circolare, o circRNA, è un tipo specifico di RNA che ha una forma diversa. Mentre l'RNA normale ha un aspetto lineare rettilineo, il circRNA è a anello. Le circRNA — un tipo la cui struttura è cruciale perché solitamente risultano abbondanti e partecipano a molti processi cellulari importanti. Per un verso, regolano come i nostri geni vengono espressi, il che può influenzare tutto, dalle modalità di crescita del nostro corpo a come reagiamo alle malattie. Le circRNA interessano molto gli scienziati; una comprensione migliore di esse può rivelare come si sviluppano le malattie e identificare nuove approcci terapeutici. Ma c'è un problema: le circRNA sono molto piccole e tendono a essere presenti in quantità molto basse nei campioni che gli scienziati studiano. Questo rende difficoltoso ricavare abbastanza circRNA per la ricerca.

Prima che fosse istituito il fondamento definitivo per raccogliere circRNA, è stato utilizzato un metodo ben consolidato chiamato Cromatografia liquida ad alta prestazione, o HPLC per brevità. L'HPLC è una tecnica versatile utilizzata per separare varie molecole in base alle loro caratteristiche fisiche e chimiche. Funziona separando le molecole in base alla dimensione e alla forma. Poiché i circRNA sono molto piccoli, possono essere facilmente persi tra le migliaia di altre molecole presenti in un campione. Ciò significa che i circRNA possono essere separati dagli altri RNA, proteine e detriti esogeni che potrebbero essere inclusi nel campione utilizzando metodi efficaci come la cromatografia per esclusione dimensionale (SEC), una tecnica HPLC. È una separazione importante per gli scienziati che hanno bisogno di isolare il circRNA per le loro ricerche.

Isolamento di circRNA basato su HPLC per un'analisi downstream precisa

Una volta che l'HPLC aiuti nella purificazione del circRNA, deve essere analizzato approfonditamente dagli scienziati per comprendere le sue funzioni in noi. I circRNA si sono rivelati molecole importanti coinvolte in molteplici funzioni biologiche, rendendo cruciale una comprensione approfondita dei vari tipi e ruoli di circRNA per decifrare il loro coinvolgimento in diverse malattie. Gli scienziati non conoscono la sequenza del circRNA purificato e avranno bisogno di conoscerla per scoprire le funzioni di questi ruoli. A questo scopo, utilizzano tecniche come la PCR inversa (RT-PCR). Con la RT-PCR, gli scienziati producono copie aggiuntive del circRNA in modo da poterlo studiare più specificamente. Sono spesso informative, fornendo informazioni su come queste molecole funzionano e cosa fanno nelle nostre cellule, analizzando le sequenze di circRNA.

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