Tänään Yaohai on niin iloinen voidessaan jakaa sen in vitro-transkriptio-protokollan pitkälle RNA:lle. Se on tehokas strategia, jonka tiedemiehet käyttävät usein RNA:n tuottamiseen laboratoriossa. Tällä tavalla tutkijat voivat tuottaa merkittävästi suuremman määrän pitkää RNA:ta — jotain, mikä on olennaista erilaisten biologisten alojen tutkimuksessa. Tässä annamme vaiheittaisen ohjeen pitkien RNA:molekyylien valmistamiseksi in vitro-transkription kautta. Puhumme myös siitä, miten voimme parantaa prosessia ja yrittää ratkaista joitakin niistä ongelmista, joita kohtaat pitkän RNA:n synteesoinnissa.
Useita oleellisia komponentteja vaaditaan in vitro-transkription yhteydessä, erityisesti pitkän RNA:n tapauksessa. Sinun täytyy tarjota enzyymi, jota kutsutaan RNA-polymeraasiksi, kirjoitusmateriaalia muodossa nukleotiidi-trifosfaate (NTP):na, reaktiota avustava puskuri ja jotain DNA-mallia. Vaiheittainen ohje, miten se tehdään, löytyy täältä yksityiskohtaisesti:
Useita tekijöitä on erityisen tärkeitä RNA:n synteesin hyvän toiminnan kannalta. Erityisesti magneesiionien määrä itse tampussa on merkittävä. RNA-polymeraasi tarvitsee suurta määrää magneesia tukeakseen oikeaa vuorovaikutusta DNA-mallineen kanssa sekä seuraavaa RNA:n kääntämistä. Toinen tärkeä näkökohta, jota on otettava huomioon, on DNA-mallineen konsentraatio. Tarkemmin sanottuna sinun täytyy käyttää riittävästi malline-DNA:a reaktiossa saadaksesi hyviä RNA-tuottoja.
Pitkä RNA tulee luonnollisesti mukanaan omia ongelmia. Nämä ongelmat voivat liittyä RNA:n hajoamiseen, vaikuttaa siihen, miten RNA kääntyy, ja muodostaa rakenteita, jotka saattavat haitata RNA:n syntymistä. Yksi tapa näiden haasteiden ratkaisemiseksi on säätää käyttämäsi puskuri. Monimutkaisemmalle RNA-rakennelle tutkijat voivat lisätä erilaisia erityisjäteaineita, kuten DTT:ta ja p-merkaptietanolia, jotta ne auttavat RNA:tta kääntymään oikein ja estävät sen liittymisen itseseen tai muodostumasta ryhmiä.
Lisäksi kaikki pitkät RNA-typit eivät ole samanlaiset ja joitakin saattaa tarvita vaihtoehtoisia synteesimenetelmiä. On olemassa erityisiä ominaisuuksia, joita tutkijat saattavat haluta lisätä RNA:han, kuten 5' kapin tai Poly-A hännän. Jos tätä tarvitaan (kuten selitetään myöhemmin), tutkijoiden tulisi sisällyttää muut enzyymit, kuten Guanylyltransferaasi ja Poly(A)Polymeraasi. Myös on valittava sopiva RNA-polymeraasi-enzyme, joka luonnostaan mahdollistaa enemmän RNA:n tuotannon. Koska pitkän RNA:n täytyy syntetisoida, meidän täytyy tunnistaa paras ehdoista.
Pitkät RNA:t in vitro -transkriptit. On olemassa useita keskeisiä käyttötapoja pitkille RNA-in vitro -transkriptiprotokollille useissa tutkimus-, analyysikokeiden ja terapeuttisten pyrkimysten yhteydessä. Se auttaa tieteellisiä tutkijoita ymmärtämään RNA:n rakennetta, sen toimintatapaa sekä sitä, miten he voivat muokata geenejä nykytekniikoiden avulla. Jokainen uusi päivä - erilaisten sairauksien löytäminen ja niiden terapiat, kuten hyvin nykyiset RNA-terapiat - antaa meille uskoa siihen, kuinka hyödyllinen tämä lukeminen tekniikka voi olla lääketieteessä.
Tässä protokollassa on paljon etuja. Elektroforeesiin perustuva metodi on yleensä tehokkain ja kustannustehokkain tapa tuottaa suuria määriä pitkää RNA:ta. RNA:n laadun lisäksi hyvä tuotos on myös tärkeä tekijä tutkijoille, jotka tarvitsevat suuria määriä RNA:ta eksperimenteissä, erityisesti kun heillä on tarpeena suuri aloituspaineisto. Lisäksi pitkän RNA:n in vitro -transkriptio on yleensä tarkempi ja toistuvempia kuin kemiallinen synteesi tai solullinen RNA-synteesi.
Yaohai BioPharma on Top 10 mikrobiologinen CDMO, joka käyttää In vitro -transkriptiprotokollaa pitkälle RNA:lle sekä sääntelyasioille. Meillä on laatujohtojärjestelmä, joka täyttää nykyiset GMP:n standardit sekä kansainväliset säännökset. Sääntelyasioiden asiantuntijatimemme on taitava kansainvälisissä sääntelykehysrakenteissa nopeuttaakseen bioteknologiatoimintojen käynnistystä. Varmistamme jäljitykselliset tuotantoprosessit, laadukkaat tuotteet sekä noudattamme Yhdysvaltain FDA:n ja Euroopan unionin EMA:n sääntöjä. Australia TGA ja Kiinan NMPA ovat myös tyytyväisiä. Yaohai BioPharma onnistui EU:n pätevän henkilön (QP) paikallisen tarkastuksen läpäisemisessä GMP-laatu- ja tuotantosuunnitelman osalta. Lisäksi olemme saaneet ensimmäiset vahvistusarviot ISO9001 Laadunhallintajärjestelmästä, ISO14001 Ympäristöhallintajärjestelmästä ja ISO45001 Työterveys- ja turvallisuushallintajärjestelmästä.
Yaohai Bio-Pharma, yksi kymmenestä suurimmasta biotuotteiden valmistajasta, on erikoistunut mikrobikokoonpannointiin. Olemme perustaneet edistyksellisen laitoksen, joka on varustettu modernilla laitteistolla ja vahvalla tutkimus- ja kehitysmenetelmillä. Meillä on viisi ainekemiallista valmistusriviä, jotka täyttävät GMP-vaatimukset mikrobikokoonpannoinnille ja puhdistukselle sekä kaksi automaattista täytönriviä kartuusseille, pulleille ja etukäteen täytetyille hypodermiahdereille. Kokoonpannointikaavojen saatavuus vaihtelee 100L:sta 500L:een, 1000L:een ja 2000L:een. In vitro -pituudelle RNA:lle käytetyt viasit ovat 1ml–25ml välillä, kun taas etukäteen täytettyjen hypodermiahdereiden ja kartuusseiden täytöspektaari kattaa 1–3ml. Tuotantotyöskentelymme on cGMP:n mukainen ja takaa vakionnetun toimituksen kliinisille näytteille sekä kaupallisille tuotteille. Tehtaamme tuottaa isoja molekyylejä, jotka lähetetään maailmanlaajuisesti.
Yaohai Bio-Pharmailla on kokemusta biologisten aineiden valmistamisessa, jotka tuotetaan mikroorganismien avulla. Tarjoamme mukautettuja RD-ratkaisuja sekä valmistuspalveluita samalla minimoiden potentiaaliset riskejä. Olemme käyttäneet monipuolisia tekniikoita, kuten rekombinantteja soluyksikköjä, rokotteita (mukaan lukien peptidirokotteet), kasvutekijöitä, hormoneja ja Long RNA:n in vitro -transkriptio-protokollaa. Olemme asiantuntijoita monissa mikroorganismeissa, kuten hiivien ekstracellular- ja intracellular-siirrossa (tuotto enintään 15g/L) sekä bakteerien intracellular-soluisten ja inklusiopainojen tuotannossa (tuotto enintään 10g/L). Olemme kehittäneet myös BSL-2-fermentaatioplatformin bakteerirokotteiden luomiseksi. Meillä on osoitus kemiallisten prosessien parantamisesta, mikä lisää tuottoja ja vähentää kustannuksia. Meillä on erittäin tehokas teknologiatiimi, joka varmistaa projektien ajankohtaisen ja laadukkaan toimituksen. Tämä auttaa meitä tuomaan ainutlaatuiset tuotteenne nopeammin markkinoille.
Yaohai Bio-Pharma on johtava yritys in vitro -transkriptio-protokollissa pitkälle RNA:lle CDMO:lla. Pääasiallinen tavoitemme on ollut mikrobien rokotteiden ja terapieitten tuottaminen lemmikkeille, ihmisille ja eläinlääketieteelliseen käyttöön. Meillä on edistyneet tutkimus- ja kehitysyksiköt sekä valmistusteknologioiden alat, jotka kattavat koko valmistusprosessin mikrobiologisten pohjusten muokkaamisesta solupankki-prosessointiin ja menetelmän suunnitteluun sekä kliinisestä että kaupalliseen valmistukseen, varmistaaksemme edistynee ratkaisujen onnistuneen toimittamisen. Olemme keränneet runsaasti tietoa bio-prosessointi-mikrobiologian alalla. Yli 200 projektia on toteutettu onnistuneesti, ja autamme asiakkaitamme noudattamaan sääntöjä, kuten US FDA:n ja EU EMA:n vaatimuksia. Autamme heitä myös käsittelemään Australialaisen TGA:n ja Kiinan NMPA:n asioita. Kokemuksemme ja asiantuntemuksemme ansiosta voimme vastata nopeasti markkinoiden tarpeisiin ja tarjota mukautettuja CDMO-palveluita.