El RNA circular, o circRNA, es un tipo específico de RNA que tiene una forma diferente. Mientras que el RNA normal tiene una apariencia lineal, el circRNA está en forma de bucle. Las circRNAs —cuyo estructura es crucial porque suelen ser abundantes y participar en muchos procesos celulares importantes. Por una parte, regulan cómo se expresan nuestros genes, lo cual puede influir en todo, desde los patrones de crecimiento de nuestro cuerpo hasta cómo respondemos a las enfermedades. Las circRNAs son de gran interés para los científicos; una mejor comprensión de ellas puede revelar cómo se desarrollan las enfermedades e identificar enfoques terapéuticos novedosos. Pero hay un problema: las circRNAs son muy pequeñas y tienden a estar presentes en cantidades muy bajas en las muestras que estudian los científicos. Esto hace difícil obtener suficiente circRNA para la investigación.
Antes de que se estableciera la fundación definitiva para recopilar circRNA, se utilizó un método bien establecido llamado cromatografía líquida de alta rendimiento, o HPLC por sus siglas en inglés. La HPLC es una técnica versátil utilizada para separar diversas moléculas según sus características físicas y químicas. Funciona separando las moléculas según su tamaño y forma. Dado que los circRNAs son muy pequeños, pueden perderse fácilmente entre los miles de otras moléculas en una muestra. Esto significa que los circRNAs pueden separarse de otros RNAs, proteínas y residuos exógenos que podrían haber estado presentes en la muestra utilizando métodos efectivos como la cromatografía de exclusión por tamaño (SEC), una técnica de HPLC. Es una separación importante para los científicos que necesitan aislar el circRNA para su investigación.
Una vez que el HPLC asiste en la purificación del circRNA, debe ser analizado exhaustivamente por los científicos para comprender sus funciones en nosotros. Los circRNAs han emergido como moléculas importantes involucradas en múltiples funciones biológicas, lo que hace que una comprensión exhaustiva de los diversos tipos y roles de los circRNA sea crítica para descifrar su participación en diversas enfermedades. Los científicos no conocen la secuencia del circRNA purificado y necesitarán conocerla para descubrir las funciones de estos roles. Para esto, utilizan técnicas como la PCR inversa (RT-PCR). Con RT-PCR, los científicos hacen copias adicionales del circRNA para poder estudiarlo de manera más específica. A menudo son informativos, proporcionando información sobre cómo funcionan estas moléculas y qué hacen en nuestras células, al analizar las secuencias de circRNA.
Los investigadores necesitan recuperar todo el circRNA que puedan obtener. Los circRNAs solo están disponibles en pequeñas cantidades en especímenes biológicos, y la cromatografía líquida de alta presión (HPLC) puede ser útil para separar y recolectar una mayor cantidad de estas moléculas críticas. De esta manera, los investigadores tienen mayores probabilidades de obtener suficiente circRNA para sus experimentos y generar hallazgos aplicables. Cuanto más circRNA puedan recolectar, más funciones y roles podrán aprender sobre la salud y la enfermedad.
Los métodos para la extracción de circRNA de materiales biológicos complejos a menudo son de alto costo (por ejemplo, ultrafiltración), tediosos y propensos a contaminación. Obtener el circRNA sin perder ninguna cantidad a menudo requiere un manejo cuidadoso y varios pasos. Es aquí donde la cromatografía líquida de alta presión (HPLC) es realmente útil. Los métodos de HPLC pueden hacer que la extracción sea un proceso más rápido y efectivo. Al reducir los pasos en la extracción, la HPLC también minimiza la posible pérdida de muestras valiosas. Este método meticuloso produce datos más confiables y ayuda a asegurar que el circRNA aislado sea lo más puro posible.
Las circRNAs son muy difíciles de estudiar y dependen de que los científicos sean extremadamente precisos en su identificación y medición. Basándose en este factor, el HPLC no solo es un paso clave para eliminar otros contaminantes, sino que también garantiza que solo se puedan aislar moléculas de circRNA, mejorando la especificidad y sensibilidad de la detección de circRNA. Esto da como resultado una muestra más limpia, lo cual es importante para la precisión de la investigación. Tener una muestra purificada de circRNA ayuda a los científicos a tener más confianza en sus resultados y menor probabilidad de cometer errores en sus estudios.
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