كشف أسرار استخراج البلازميد ذي الجودة العالية

استخراج البلازميد ضروري للباحثين. كمتجهات جينية، تعتبر البلازميدات حيوية في أبحاث اللقاحات والعلاج الجيني، حيث يهم الجودة. تشمل عوامل الجودة الرئيسية النسبة المتماسكة فائقاً ومحتوى الإندوتوكسين. تختلف اللوائح: إدارة الأغذية والأدوية ≥80٪، وهيئة SMPA ≥85٪، وإدارة NMPA ≥90٪، مع أقل من 5٪ من الحمض النووي الخطي أو الدائري المفتوح. غالباً ما يفضل العملاء نسبة تصل إلى ≥95٪ متماسكة فائقاً. مستويات الإندوتوكسين هي: البحث (>50 وحدة دولية/مايكروغرام)، التحويل (<50 وحدة دولية/مايكروغرام)، وخالية من الإندوتوكسين (<0.1 وحدة دولية/مايكروغرام).

الحمض النووي البلازميدي المتماسك فائقاً

تشمل البلازميدات المستخرجة من إيشيريشيا كولاي الحمض النووي المتماسك فائقاً (SC)، والدائري المفتوح (OC)، والخطي (L). تعزز نسبة SC العالية كفاءة التحويل والتعبير. على سبيل المثال، فإن تحويل بلازميد بنسبة 85.45٪ SC أعلى بمقدار 2.5 مرة، وتعبير HGF لبلازميد بنسبة 93.28٪ SC أعلى بمقدار 1.8 مرة، مما يؤكد تفوق الحمض النووي SC.

DNA دائري مفتوح: عندما ينكسر أحد السلاسل في DNA ثنائي السلسلة، تصبح البنية الملفوفة فضفاضة، مما يشكل بلازميد دائري مفتوح ذو حجم أكبر يهاجر بشكل أبطأ أثناء التحليل الكهربائي ويقع في الأعلى.

DNA خطي: عندما تنكسر كلا السلاسل في DNA البلازميدي، يتشكل هيكل خطي ذو حجم نسبيًا أصغر يهاجر بشكل أسرع من DNA الدائري المفتوح ولكنه أبطأ من DNA الملفوف فوق العادة، ويشغل المركز الثاني.

DNA ملفوف فوق العادة: يتداخلان في شكل حلزوني، مما يؤدي إلى تشكيل بنية ملفوفة فوق العادة بناءً على الحلزونات DNA. لديه الحجم الأصغر ويهاجر بشكل أسرع أثناء التحليل الكهربائي، ويقع في الأسفل.

التحليل الكمي لنسبة الالتفاف فوق العادة

تستخدم المعامل التحليل الكهربائي باستخدام جل الآغاري (AGE) وبرنامج Gel-Pro Analyzer لتحديد نسبة الالتفاف فوق العادة عبر صور التحليل الكهربائي. تظهر صورة واحدة 97.539% من DNA SC، بينما تظهر صورة أخرى 63.833% من DNA SC و 36.167% من DNA OC (DNA الخطي غير مرئي).

سر:endotoxin في البلازميدات

الإندوتوكسين هو مكون من الطبقة الخارجية لجدار خلايا البكتيريا السالبة غرام، والذي يُطلق بعد موتها أو انصهارها، ويحتوي على الليبو POLIT saccharide A السام. أثناء استخراج البلازميد، يدخل الإندوتوكسين محلول الانحلال، مما يؤثر على كفاءة التحويل ويشعل réponses المناعية غير المحددة، مما يؤدي إلى نتائج إيجابية خاطئة في التجارب.

تحليل كمي وكيفي للإندوتوكسين

اختبار مستخلص الخلايا الأميبية لليمولوس (LAL) يكشف عن الإندوتوكسين عبر التكتل مع حمض 2-كيتو-3-ديوكسيأكتونيك (KDO) الموجود في الليبو POLIT saccharide (LPS). إنه تحليل نوعي وشبه كمي، حيث يشير إلى وجود الإندوتوكسين من خلال التجلط أو تغيير اللون عند خلطه مع العينات.

توفّر Yaohai Bio-Pharma بلازميدات متماسكة خالية من الإندوتوكسين. التعامل مع Yaohai يعزز كفاءة التحويل والتعبير. تحتوي البلازميدات المقدمة على نسبة ≥95% من الشكل المتماسك (متوسط ±10%) ومستويات إندوتوكسين ≤0.1، ≤0.01، أو ≤0.005 EU/μg.

نحن نبحث أيضًا بنشاط عن شركاء عالميين من المؤسسات أو الأفراد. نقدم أكثر التعويضات تنافسية في الصناعة. إذا كان لديك أي أسئلة، لا تتردد في التواصل معنا: [email protected]