يتضمن إنتاج mRNA لـ eGFP (البروتين الفلوري الأخضر المعزز) سلسلة من تقنيات البيولوجيا الجزيئية لتوليد جزيء RNA وظيفي يشفر للتعبير عن eGFP. في مجال mRNA لـ eGFP، اكتسبت Yaohai Bio-Pharma خبرة واسعة في تلبية الاحتياجات المحددة للعملاء. بالاستفادة من خبرتنا، قمنا بتوليف تدفق العملية لإنتاج mRNA لـ EGFP.

1. استنساخ جين eGFP:إنها عملية الحصول على تسلسل الجينات المشفر لـ eGFP. وعادة ما يتم استنساخ هذا الجين من ناقل بلازميدي موجود مسبقًا أو يتم تصنيعه بشكل مصطنع بناءً على تسلسل النوكليوتيدات المعروف. ثم يتم التحقق من الجين المستنسخ من خلال التسلسل لضمان الدقة.
2. تحسين الجينات للتعبير:للتعبير الأمثل في النظام المستهدف (على سبيل المثال، الخلايا الثديية، أو البكتيريا، أو أنظمة النسخ المختبرية)، قد يخضع جين eGFP لتحسين الكودون. يتضمن هذا استبدال الكودونات النادرة في التسلسل الأصلي بكودونات أكثر استخدامًا في الكائن المضيف، مما يزيد من فرص الترجمة الفعالة.
3. في المختبر إعداد قالب النسخ:بمجرد أن يصبح الجين المحسن جاهزًا، يتم دمجه في ناقل مناسب، غالبًا ما يكون عبارة عن بلازميد، يحتوي على عناصر تنظيمية ضرورية للنسخ (على سبيل المثال، تسلسل المحفز). يعمل هذا البلازميد كقالب للنسخ في المختبر.
4. في المختبر نسخ:باستخدام قالب البلازميد المُجهز، يتم إجراء النسخ في المختبر لتخليق mRNA لـ eGFP. تتضمن هذه العملية استخدام إنزيمات بوليميراز الحمض النووي الريبي، والتي تتعرف على تسلسل المحفز وتبدأ النسخ، مما ينتج عنه خيط RNA مكمل لقالب الحمض النووي. اعتمادًا على التطبيق المطلوب، يمكن تغطية mRNA أو تعدد الأدينيلات أو تعديله لتعزيز الاستقرار وكفاءة الترجمة.
5. التنقية ومراقبة الجودة:ثم يتم تنقية mRNA eGFP المصنّع لإزالة أي ملوثات، بما في ذلك الحمض النووي والبروتينات والنوكليوتيدات الحرة. ويمكن أن تشمل طرق التنقية الرحلان الكهربائي للهلام أو الكروماتوغرافيا العمودية أو الفصل القائم على الخرز. وبعد التنقية، يتم تحليل mRNA من حيث الجودة، بما في ذلك التركيز والنقاء والسلامة، باستخدام تقنيات مثل مطيافية الأشعة فوق البنفسجية والمرئية والرحلان الكهربائي للهلام.
6. التخزين والتسليم:عادةً ما يتم تخزين mRNA eGFP المنقى في درجات حرارة منخفضة للحفاظ على الاستقرار. للاستخدام التجريبي، يمكن توصيل mRNA إلى الخلايا باستخدام طرق مختلفة، بما في ذلك الكهرومسام، أو الاستخراج الدهني، أو النواقل الفيروسية، اعتمادًا على التطبيق المحدد ونوع الخلية المستهدفة.
7. التعبير والتحقق:بمجرد دخوله إلى الخلية، يتم ترجمة mRNA لـ eGFP إلى البروتين الفلوري الأخضر المعزز، والذي يمكن رؤيته باستخدام المجهر الفلوري. وهذا يسمح بالتحقق من نجاح إنتاج mRNA وتوصيله والتعبير عنه.

باختصار، يتضمن إنتاج mRNA لـ eGFP استنساخ الجين، وتحسينه للتعبير، وإعداد قالب نسخ في المختبر، وإجراء تفاعل النسخ، وتنقية mRNA الناتج، وأخيرًا توصيله إلى الخلايا للتعبير والتحقق.

كما أننا نبحث بنشاط عن شركاء عالميين مؤسسيين أو فرديين. نحن نقدم التعويض الأكثر تنافسية في هذه الصناعة. إذا كان لديك أي أسئلة، فلا تتردد في الاتصال بنا: [email protected]