بلند قسمتی پلازمڈ اخراج کے راز کھولنا

پلاسمڈ اخراج تحقیق کاروں کے لئے ضروری ہے۔ گینے ویکٹرز کے طور پر، پلاسمڈز واکسائن تحقیق اور ژن تھراپی میں جہاں کوالٹی کا مسئلہ ہے، وہاں ان کی اہمیت ہے۔ کوالٹی کے اہم عوامل میں سپرکوائیلڈ تناسب اور اینڈوٹوکسن کی مقدار شامل ہیں۔ رجولیشنز مختلف ہوتی ہیں: FDA ≥80%， SMPA ≥85%， NMPA ≥90%، <5% لائنیئر/اوپن-سرکولر ڈی این اے۔ مشتریان عام طور پر ≥95% سپرکوائیلڈ چاہتے ہیں۔ اینڈوٹوکسن کی سطحیں یہ ہیں: تحقیق کے لئے (>50 EU/µg)، ٹرانس فیکشن کے لئے (<50 EU/µg)، اور اینڈوٹوکسن فری (<0.1 EU/µg)۔

سپرکوائیلڈ پلاسمڈ ڈی این اے

ایسچیریشیا کولی سے حاصل ہونے والے پلاسمڈز میں سپرکوائیلڈ (SC)، اوپن-سرکولر (OC)، اور لائنیئر (L) ڈی این اے شامل ہیں۔ زیادہ SC تناسب ٹرانس فیکشن کفاءت اور اظہار کو بڑھاتا ہے۔ مثلاً، 85.45% SC پلاسمڈ کی ٹرانس فیکشن 2.5 گنا زیادہ ہوتی ہے، اور 93.28% SC پلاسمڈ کی HGF اظہار 1.8 گنا زیادہ ہوتی ہے، جو SC ڈی این اے کی برتری کو ثابت کرتی ہے۔

اپن گرد프로그رامی DNA: جب ڈبل سٹرینڈڈ DNA کے ایک سٹرینڈ میں توڑ پड़تا ہے، تو سوپرکوئلڈ سٹرکچر کم شدید ہوتا ہے، ایک اوپن سرکولر پلاسمڈ بناتا ہے جس کا حجم بڑھ جاتا ہے اور جو الیکٹروفریسیس کے دوران آخیری طور پر تشریح ہوتا ہے اور اوپری پوزیشن پر رہتا ہے۔

لائنیئر DNA: جب پلاسمڈ DNA کے دونوں سٹرینڈز توڑ پڑتے ہیں، تو ایک لائنیئر سٹرکچر بناتا ہے، جس کا حجم کم ہوتا ہے جو اوپن سرکولر DNA سے زیادہ تیزی سے تشریح ہوتا ہے لیکن سوپرکوئلڈ DNA سے کم تیزی سے، دوسرا پوزیشن پر رہتا ہے۔

سوپرکوئلڈ DNA: دو ہیلیکسز متبادل ہوتے ہیں، جو DNA ہیلیکس پر مبنی سوپرکوئلڈ سٹرکچر بناتے ہیں۔ اس کا حجم سب سے چھوٹا ہوتا ہے اور الیکٹروفریسیس کے دوران سب سے تیزی سے تشریح ہوتا ہے، نیچے کی پوزیشن پر رہتا ہے۔

سوپرکوئلڈ تناسب کا کمیابی تجزیہ

Labs ایگاروس گیل الیکٹروفریسیس (AGE) اور گیل پرو آنیلائزر کو استعمال کرتے ہیں کہ سوپرکوئلڈ تناسب کو الیکٹروفریسیس تصاویر کے ذریعے ججمنٹ کرنے کے لیے۔ ایک تصویر میں 97.539% SC DNA دکھائی دیتا ہے، جبکہ دوسری میں 63.833% SC اور 36.167% OC DNA دکھائی دیتا ہے (لائنیئر DNA غیر وضاحت ہے)۔

پلاسمڈز میں اینڈوٹوکسن کا راز

ایندوٹاکسن گرام نیگیٹیو باکٹیریا کے سیل وال کے باہری طبقہ کا ایک مول جو باکٹیریا کی موت یا لائسیس کے بعد تحریر ہوتا ہے، جس میں زہریلے لپوسیچارائڈ A شامل ہوتا ہے۔ پلازمڈ استخراج کے دوران، اینڈوٹاکسن لائسیس حل میں داخل ہوتا ہے، جو ٹرانسفیکشن کی کارکردگی کو متاثر کرتا ہے اور غیر خاصیتی ایمیون ردعمل کو شروع کرتا ہے، جس سے تجربات میں غلط مثبت نتائج حاصل ہوتے ہیں۔

ایندوٹاکسن کا کمیتی اور کوالیٹیٹو آنالیسیس

لیمیولس ایمبوسائٹ لائسیٹ (LAL) ٹیسٹ لپوسیچارائڈ (LPS) میں موجود 2-کیٹو-3-ڈی옥سیاکٹونک اسید (KDO) کے ساتھ ایگلوٹائنیشن کے ذریعہ اینڈوٹاکسن کا پتہ لگاتا ہے۔ یہ کوالیٹیٹو اور سیمی-کمیتی ہے، جو نمونوں کو مخلوط کرنے پر قابض ہونے یا رنگ کے تبدیلی کے ذریعہ اینڈوٹاکسن کی موجودگی کو ظاہر کرتا ہے۔

یاؤہائی بائیو فارما اینڈوٹاکسن مفت سوپرکوئیلڈ پلازمڈز پیش کرتی ہے۔ یاؤہائی کو آؤٹسورس کرنے سے ٹرانسفیکشن اور عبارت کی کارکردگی میں بہتری آتی ہے۔ دستیاب پلازمڈز میں ≥95% SC تناسب (اوسط 85%±10%) ہوتا ہے اور اینڈوٹاکسن سطح ≤0.1، ≤0.01، یا ≤0.005 EU/μg ہوتی ہے۔

ہم عالمی شرکاء یا انفرادی شرکاء تلاش کر رہے ہیں۔ ہم صنعت میں سب سے زیادہ رقابتی Compensations پیش کرتے ہیں۔ اگر آپ کو کوئی سوال ہے تو ہمارے ساتھ تماس کریں: [email protected]