Сьогодні Yaohai так захоплено поділитися своїм протоколом транскрипції in vitro для довгих РНК. Це ефективна стратегія, яку вчені часто використовують для виробництва РНК у лабораторії. За допомогою цього методу дослідники можуть отримати значну кількість довгих РНК — щось, що є необхідним для досліджень у різних біологічних галузях. Тут ми надаємо поетапний гід з підготовки довгих РНК шляхом транскрипції in vitro. Ми також обговоримо, як можна покращити процес і спробуємо вирішити деякі проблеми, з якими ви можете стикатися при синтезі довгих РНК.
Для транскрипції in vitro, особливо для довгих РНК, потрібні декілька ключових компонентів. Вам знадобиться ензим під назвою РНК-полімераза, матеріали для запису у вигляді трифосфатних нуклеотидів (NTP), буфер для допомоги реакції та деякий ДНК-шаблон. Як зробити це крок за кроком, детальний гід ви можете знайти тут:
Нескілька факторів є дуже важливими для правильного працювання синтезу РНК. Найбільш вищевираженим є кількість магнієвих іонів у буфері самому. Полімераза РНК потребує значної кількості магнію для підтримки правильного взаємодії з ДНК-шаблоном та подальшого складання РНК. Другим важливим аспектом, який слід врахувати, є концентрація шаблонної ДНК. Конкретно, вам потрібно мати достатню кількість шаблонної ДНК у реакції, щоб отримати хороші викиди РНК.
Довгий РНК, звичайно, матиме свої проблеми. Ці проблеми можуть стосуватися розпаду РНК, впливати на те, як складається РНК, і утворювати структури, які потенційно можуть заваджувати синтезу РНК. Один із шляхів вирішення цих викликів — це коригування буфера, який ви використовуєте. Для більш повної структури РНК дослідники можуть додавати різні спеціальні хімічні речовини, такі як ДТТ і п-меркаптоетанол, щоб допомогти РНК правильно складатися та запобігти її прилепанню або спекоті.
Крім того, не всі типи довгих РНК однакові, і деяким може знадобитися альтернативний метод синтезу. Є спеціальні особливості, які дослідники можуть хотіти додати до РНК, наприклад, додавання 5' капсу чи полі-A хвоста. Якщо це необхідно (як пояснюється далі), то дослідники повинні включати інші ензими, такі як гуанілілтрансфераза та полі(A)полімераза. Також потрібно вибрати відповідний ензим РНК-полімерази, який природньо дозволяє їм виробляти більше РНК. Найскоріше, коли довга РНК має бути синтезована, нам потрібно визначити найкращі умови для цього.
Довгі РНК транскрипти в vitro Є кілька ключових застосувань протоколу довгих РНК в vitro у різних дослідницьких, аналітичних та терапевтичних напрямках. Він допомагає науковцям зрозуміти структуру РНК, її функціонування та те, як вони можуть модифікувати гени сучасними технологіями. З кожним днем відкриття нових хвороб та їх терапій, таких як сучасні РНК-терапії, переконують нас, наскільки корисною може бути ця технологія для медицини.
Використання цього протоколу має багато переваг. Метод, що базується на електрофорезі, зазвичай є найбільш ефективним і вигідним способом виробництва великих кількостей довгих РНК. Крім якості РНК, добра видача також є важливим фактором для дослідників, щоб допомогти їм у дослідженнях, особливо якщо їм потрібні великі кількості РНК для експериментів через велику початкову матерію. Крім того, транскрипція in vitro для довгих РНК зазвичай є точнішою і більш повторюваною, ніж хімічне синтезування або клітинний синтез РНК.
Yaohai BioPharma — це одна з топ-10 компаній CDMO в галузі мікробіології, яка використовує протокол In vitro Transcript для довгих РНК, а також займається регуляторними справами. У нас є система управління якістю, яка відповідає сучасним стандартам GMP та глобальним регуляціям. Наша команда експертів з регуляторних справ добре орієнтується у глобальних регуляторних рамках для прискорення запуску біологічних продуктів. Ми забезпечуємо відслідковувані процеси виробництва, якість продукції та дотримання правил Американської FDA та Європейської EMA. Австралійська TGA та Китайська NMPA також задоволені. Yaohai BioPharma успішно пройшла обличкову перевірку від кваліфікованої особи (QP) Європейського Союзу для нашої системи якості GMP та виробничої установи. Крім того, ми успішно пройшли першу сертифікацію за стандартами ISO9001 Системи управління якістю, ISO14001 Системи управління навколишнім середовищем та ISO45001 Системи управління безпекою праці та охороною здоров'я.
Yaohai Bio-Pharma, виробник біологічних продуктів з топ-10, є спеціалістом у галузі мікробної ферментації. Ми створили сучасний комплекс, оснащений найновішими технологіями та маючи сильні можливості в дослідницько-розробочій (RD) та серійній виробництві. У нас є п'ять ліній виробництва речовин, які відповідають вимогам GMP для мікробної ферментації та очищення, а також дві автоматизовані лінії упаковки для картушів, флаконів та шприців з попередньо наповненими сировинами. Масштаби ферментації варіюються від 100Л до 500Л, 1000Л та 2000Л. Протокол транскрипції in vitro для довгих РНК для в'язів становить від 1мл до 25мл, тоді як специфікації наповнення попередньо наповнених шприців та картушів охоплюють об'єми від 1-3мл. Наш цех виробництва відповідає стандартам cGMP і гарантує стабільне постачання клінічних пробів та комерційних продуктів. Наши великі молекули відправляються у всі кути світу.
Yaohai Bio-Pharma має досвід у виробництві біологічних препаратів, які створюються з мікроорганізмів. Ми пропонуємо індивідуальні розв'язки РД, а також послуги виробництва, мінімізуючи потенційні ризики. Ми працювали з різними технологіями, такими як рекомбінаційні клітинні підодинки, вакцини (включаючи пептиди), фактори росту, гормони та протокол In vitro Transcript для довгого RNA. Ми є фахівцем у багатьох мікроорганізмах, таких як дрожжовий екстра-клітинний та інтра-клітинний секреція (доходять до 15г/Л) та бактеріальна інтра-клітинна солюбільність та включення тіла (доходять до 10г/Л). Ми також розробили платформу ферментування BSL-2 для створення бактеріальних вакцин. У нас є історія успішного покращення процесів виробництва, що збільшує видачу та зменшує витрати. У нас є високоекфективна технічна команда, яка забезпечує своєчасне та високоякісне виконання проектів. Це допомагає нам швидше вивести вашу унікальну продукцію на ринок.
Yaohai Bio-Pharma є лідером у сфері виробництва транскрипцій in vitro для довгих РНК CDMO. Наш головний фокус спрямований на виробництво мікробних вакцин та терапевтичних засобів для лікування тварин, людей та забезпечення ветеринарного здоров'я. Ми маємо передові технологічні платформи ДД та виробництва, які охоплюють весь процес виготовлення - від інженерного проектування мікробних штамів до обробки банків клітин та методичного дизайну, а також клінічного та комерційного виробництва, щоб гарантувати успішне надання найбільш сучасних розв'язків. Ми накопали велику кількість досвіду у галузі біообробки мікробів. Було успішно завершено більше 200 проектів, і ми допомагаємо нашим клієнтам виконувати регуляційні вимоги, такі як вимоги УС FDA та ЄС EMA. Ми також допомагаємо їм працювати з Australia TGA та China NMPA. Завдяки нашому досвіду та експертності, ми можемо швидко реагувати на ринкові вимоги та пропонувати спеціалізовані послуги CDMO.