Otkrivanje tajni visokokvalitetnog izvlačenja plazmida

Izdvajanje plazmida je ključno za istraživače. Kao genetski vektori, plazmidi su neophodni u istraživanju vakcina i genetske terapije, gde se kvalitet broji. Ključni činioci kvaliteta uključuju proporciju superkolinearnog oblika i sadržaj endotoksa. Propisi se razlikuju: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, sa <5% linearnog/otvoreno-kružnog DNA. Klijenti često preferiraju ≥95% superkolinearnog oblika. Nivoi endotoksina su: za istraživanje (>50 EU/µg), transfekcija (<50 EU/µg) i bezendotoksin (<0.1 EU/µg).

Superkolinearni plazmidni DNA

Plazmidi iz Escherichia coli uključuju superkolinearni (SC), otvoreno-kružni (OC) i linearni (L) DNA. Visoka proporcija SC oblika povećava efikasnost transfekcije i ekspresiju. Na primer, transfekcija plazmida sa 85.45% SC je 2.5 puta veća, a ekspresija HGF plazmida sa 93.28% SC je 1.8 puta veća, što potvrđuje premoć SC DNA.

Otvoreno-kružna DNA: Kada se jedan lanc dvostruke DNA prelomi, superzavijena struktura postaje široka, formirajući otvoreni-kružni plazmid sa većim obimom koji se najsporije migrira tijekom elektroforeze i nalazi se na vrhu.

Linearna DNA: Kada se oba lanca plazmidske DNA prelome, formira se linearna struktura, sa relativno manjim obimom koja se brže migrira od otvoreno-kružne DNA, ali sporođe od superzavijene DNA, nalazi se na drugom mjestu.

Superzavijena DNA: Dva heliksa se prepleću, zavijajući se u superzavijenu strukturu temeljenu na heliksu DNA. Ima najmanji obim i najbrže se migrira tijekom elektroforeze, nalazi se na dnu.

Kvantitativna analiza proporcije superzavijenog stanja

Laboratoriji koriste agaroznu gel elektroforezu (AGE) i Gel-Pro Analyzer za procjenu proporcije superzavijenog stanja putem slika iz elektroforeze. Jedna slika prikazuje 97,539% SC DNA, dok druga prikazuje 63,833% SC i 36,167% OC DNA (linearna DNA nije vidljiva).

Tajna endotoksinova u plazmidima

Endotoksin je komponenta vanjske slojeva stjenke Gram-negativnih bakterija, koji se elibira nakon smrti ili lizisa bakterija, i sadrži toksičan lipopolisaharid A. Tijekom izdvajanja plazmida, endotoksin ulazi u lizatnu razinu, što utiče na učinkovitost transfekcije i izaziva nespecifične imunološke odgovore, što može dovesti do lažno pozitivnih rezultata u eksperimentima.

Kvantitativna i kvalitativna analiza endotoksina

Test Limulus amebocitnog ližaja (LAL) otkriva endotoksin putem aglutinacije s 2-keto-3-deoksioktonovom kiselinom (KDO) iz lipopolisaharida (LPS). Ovaj test je kvalitativni i polukvantitativni, i pokazuje prisutnost endotoksina preko zgušćenja ili promjene boje kada se meša s uzorcima.

Yaohai Bio-Pharma nudi superkružne plazmode bez endotoksina. Izvođenje posla Yaohai povećava učinkovitost transfekcije i ekspresije. Dostavljani plazmodi imaju proporciju ≥95% SC (prosječno 85%±10%) i razine endotoksina ≤0.1, ≤0.01 ili ≤0.005 EU/μg.

Takođe aktivno tražimo globalne parcele, institucionalne ili individuelne. Ponudili smo najbolju kompenzaciju u industrijи. Ako imate bilo kakva pitanja, slobodno nas kontaktirajte: [email protected]