Optimizacija celularne integriteta E. coli za biofarmaceutsku proizvodnju

U području biofarmaceutske industrije, Escherichia coli (E. coli) igra ključnu ulogu kao domaćin za izraz rekombinantnih proteina. Celularna integritet E. coli je od vitalne važnosti za količinu proteina, kvalitet i proizvodne troškove. Ova integritet uglavnom uključuje strukturu i funkciju unutrašnje membrane (IM) i spoljne membrane (OM).

Yaohai Bio-Pharma ima 15 godina iskustva u fermentaciji E. coli i izrazu rekombinantnih proteina. Koristimo različite strategije da održimo visoku cellularnu integritet E. coli, pri čemu je plazmidna dobijača premašila 1g/L unutar ciklusa odgoja od 30 sati. Na osnovu proširenog iskustva u mikrobiološkom izrazu, Yaohai Bio-Pharma je sažela nekoliko efektivnih strategija za praćenje i poboljšanje cellularne integriteta E. coli tijekom biofarmaceutske proizvodnje.

Tehnike za praćenje cellularne integriteta E. coli

Citarne Fluorescencije: Koristi fluorescentske barve za razlikovanje stanja celija, kao što je propidijum jodid za otkrivanje vitalnosti celija i SYTO9 za procenu promicajnosti OM-a. Međutim, zahteva velike troškove za barve i složene operacije.

Bojančaste Metode: Odbijaju lišenje celija otkrivajući sadržaj DNA, aktivnosti enzima itd. u nadmorsu, kao što je korišćenje reagensa PicoGreen i testovi aktivnosti alkalne fosfataze. Ove metode su, međutim, obavezne i zahtevaju skuplje reagente.

Visoko Performantna Tekuća Hromatografija: Koristi se za vanredno otkrivanje koncentracije izvanrednih proizvoda kako bi se procenila promicajnost OM-a. Ipak, njena automatizacija je složena i vreme analize je dugacko.

Tehnike Vibracijske Spektroskopije: Kao što su spektroskopija bliskog infracrvenog i srednjeg infracrvenog, koje imaju potencijalne primene ali zahtevaju preodoljivanje spektralne interferencije i izazovima analize podataka.

Dielektrička spektroskopija: Procenjuje integritet membrane merenjem impendanse celijskih sastojaka, omogućavajući stvarno-vremenski online nadzor. Međutim, osjetljiva je na zaklone i teško je kalibrirati.

Biosenzori: Mogu otkriti spojeve koji izlekuju iz unutraćnosti celija ili periplazma, ali susreću probleme poput težina u regeneraciji senzora.

Merenja viskoznosti i gustoće: Niske su po ceni i brze u analizi, ali nedostaju selektivnost i zahtevaju uzimanje u obzir podataka iz više serijskih proizvodnji za procenu.

Faktori koji utiču na celijsku integritet

Inženjerstvo šteda: Menja integritet OM kroz genetsko inženjerstvo, kao što je mutiranje lipoproteinskih gena, ali može uticati na rast šteda.

Inducirani stres: Previsek izražavanje rekombinantnih proteina vodi do metaboličkog tereta, što utiče na fiziologiju celije. Zbog toga je neophodna razumljiva regulacija nivoa izražavanja.

Stopa davanja substarta: I previsoka i previše niska stopa davanja utiču na ližu celija i integritet OM.

Temperatura i aeracija: Visoke temperature i niska raspoloživost kiseonika povećavaju izraz stresa i promu Om talasa, respektivno, ali specifični efekti variraju.

Osmotika: Koriste se za eliziju periplazmatičkih proteina, ali štete životnu sposobnost ćelija, što ograničava njihovu primenu.

Zaključak: Buduća istraživanja moraju da se dublje upuste u mehanizme i uslove popravke membrana kako bi precizno kontrolisali integritet ćelijske membrane. Optimalizacija metoda nadzora i analiza uticajnih faktora očekuje se da će poboljšati kvalitet proizvoda, čime će se podstići razvoj biofarmaceutske industrije.

Takođe aktivno tražimo globalne partnerše, bilo institucionalne ili individualne. Ponudili smo najbolju kompensaciju u ovom sektoru. Ako imate bilo kakva pitanja, slobodno nas kontaktirajte na [email protected]