Proces proizvodnje mRNA eGFP-a

Proizvodnja mRNA eGFP (Pojačan Zeleni Florescentni Protein) uključuje seriju tehnika molekularne biologije za generisanje funkcionalnog RNA molekula koji kodira izraz eGFP. U oblasti mRNA eGFP, Yaohai Bio-Pharma je nagomilala prošireno iskustvo u odgovaranju na specifične potrebe klijenata. Koristeći naše iskustvo, sintetizovali smo procesnu mapu za proizvodnju mRNA EGFP.

1. Kloniranje eGFP gene : Potrebno je da se dobije genomski niz koji kodira eGFP. Ovaj gen se tipično klonira iz prethodno postojećeg plazmidnog vektora ili sintetički izgrađuje na osnovu poznatog nukleotidskog niza. Klonirani gen zatim se verifikuje sekvenciranjem kako bi se osigurala tačnost.
2. Optimizacija gene za izraz : Za optimalno izražavanje u ciljnom sistemu (npr. mašinskih celija, bakterija ili in vitro transkripcionskih sistema), eGFP gen može proći kroz kodonsku optimizaciju. To uključuje zamenu redke kodone u izvornom nizu sa češće korišćenim u domaćem organizmu, povećavajući šanse za efikasnu translaciju.
3. U vitro Priprema šablon za transkripciju : Kada je optimizovani gen spreman, ugrađuje se u odgovarajući vektor, često plazmid, koji sadrži regulacione elemente neophodne za transkripciju (npr. sekvencu promotera). Ovaj plazmid služi kao šablon za in vitro transkripciju.
4. U vitro Transkripcija : Koristeći pripremljeni plazmidni šablon, in vitro transkripcija se vrši kako bi se sintetizirao eGFP mRNA. Ovaj proces uključuje upotrebu RNA polimeraznih enzima koji prepoznaju promotor niz i pokreću transkripciju, proizvođeći komplementarni RNA lanc DNA šablona. Zavisno od željene primene, mRNA može biti obavezana, poliadenilirana i/ili modifikovana kako bi se poboljšala stabilnost i efikasnost translacije.
5. Čišćenje i kontrola kvaliteta : Sintetizirani eGFP mRNA zatim se čisti kako bi se uklonile sve kontaminante, uključujući DNA, proteine i slobodne nukleotide. Metode čišćenja mogu da uključuju gel elektroforezu, kolonsku hromatografiju ili čišćenje na osnovu čestica. Nakon čišćenja, mRNA se analizira po kvalitetu, uključujući koncentraciju, čistoću i integritet, koristeći tehnike kao što su UV-Vis spektrofotometrija i gel elektroforeza.
6. Skladиште i dostava : Očišćena eGFP mRNA obično se smešta pri niskim temperaturama kako bi se održao stabilnost. Za eksperimentalnu upotrebu, mRNA može biti dostavljena u ćelije različitim metodama, uključujući elektroporaciju, lipekciju ili virusne vektore, zavisno od specifične primene i tipa ciljane ćelije.
7. Izrazivanje i verifikacija : Nakon što se uđe u ćeliju, eGFP mRNA se prevodi u pojačan zeleno fluorescentski protein, koji se može videti pomoću fluorescentske mikroskopije. To omogućava verifikaciju uspešnog proizvodnje, dostave i izražavanja mRNA.

U kratkom, proizvodnja eGFP mRNA uključuje kloniranje gene, optimizaciju za izrazivanje, pripremu šablon za in vitro transkripciju, vršenje transkripcijske reakcije, čišćenje rezultujuće mRNA, i na kraju njenu dostavu u ćelije za izrazivanje i verifikaciju.

Takođe aktivno tražimo globalne parcele, institucionalne ili individuelne. Ponudili smo najbolju kompenzaciju u industrijи. Ako imate bilo kakva pitanja, slobodno nas kontaktirajte: [email protected]