Inovativne tehnike montaža za velomernu sintezu gena

Tehnologija sastavljanja za sintezu velikih DNK fragmenata od nule je ključna točka u sintezi gena, obuhvatajući metode kao što su BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibsonova asambleja, CPEC i Overlap PCR. Zbog ograničenja trenutne tehnologije u tačnoj sintezi DNK dužine gene u jednom koraku, neophodno je kombinovati in vitro i in vivo tehnike sastavljanja kako bi se oligonukleotidni fragmenti sintetizovani u segmentima sastavili u dugacke DNK fragmente.

In vitro tehnike sastavljanja

Klasificiraju se na različite metode na osnovu veličine fragmenata i karakteristika niza, sa zajedničkim zahtevom za korišćenjem alat enzima. Overlap PCR, koji je zasnovan na metodi DNA polimeraze, je jednostavan i brz u izvođenju. BioBrick i BglBrick metode, koje zavise od isoschizomera, omogućavaju standardizovano sastavljanje, iako je BioBrick metoda neprimerna za fuzije proteina. Golden Gate kloniranje, koje je zasnovano na tip IIS restrikcionih enzima, omogućava efikasno bezrežno lepljenje više fragmenata. Gibsonova metoda sastavljanja, koja koristi kombinaciju više alat enzima, omogućava bezrežno lepljenje sa veličinom fragmenata koja može dostići nekoliko stotina kb. Standardizovani dizajn DNA komponenti povećava stepen iskorišćenja postojećih fragmenata.

Tehnike in vivo sastavljanja

Iako u vitro sastavljeni fragmenti mogu da postignu veličinu od nekoliko stotina kb, često je dobija nedovoljna, što zahteva umnožavanje pomoću organizama kao što su Escherichia coli. Prilikom štampanja fragmenata dužinom preko 20 kb, često se koriste rekombinantni sistemi unutar organizama, uključujući Bacillus subtilis, kvasce i inženirane bakterije. Kvasac, kao često korišćeni domaćin, je prepoznat po svojoj efikasnoj mogućnosti homološne rekombinacije već godinama. Može se koristiti za štampanje umetnih hromozoma dužine do nekoliko megabaza (Mb). Pored toga, Saccharomyces cerevisiae iznajmljuje neverovatnu toleranciju prema dužini hromozoma, obezbeđujući teoretsku osnovu za korišćenje kvasaca pri konstruisanju ultra-dugi hromozoma kod višecelularnih organizama.

Primene

Yaohai Bio-Pharma uglavnom koristi dva načina montaže za sintezu gena: montažu ligazom i montažu DNK polimerazom. Metoda ligazne montaže spaja preklapajuće i hibridizovane 5'-fosforilirane oligonukleotidne fragmente u dvostruku DNK pomoću DNK ligaze. Metoda polimerazne montaže koristi DNK polimerazu da produkuje proširenje preklapajućih oligonukleotidnih fragmenata kroz hibridizaciju, dobijajući mešavinu različitih dužina, a na kraju uspešno amplifikuje potpune fragmente koji su sastavljeni pomoću primera. Yaohai može da pomogne klijentima da ispunjava specifične zahteve u sintezi gena.

Takođe aktivno tražimo globalne parcele, institucionalne ili individuelne. Ponudili smo najbolju kompenzaciju u industrijи. Ako imate bilo kakva pitanja, slobodno nas kontaktirajte: [email protected]