Danas je Yaohai tako uzbuđen što deli svoj protokol in vitro transkripcije za dugi RNA. To je učinkovita strategija koju naučnici često koriste za proizvodnju RNA u laboratoriju. Na ovaj način istraživači mogu da proizvedu značajan broj dugih RNA-ova — nešto šta je esencijalno za proučavanje u različitim biološkim oblastima. Ovde pružamo korak po korak vodič za pripremu dugih RNA-ova putem in vitro transkripcije. Takođe ćemo raspraviti o tome kako možemo da poboljšamo proces i pokušamo da rešimo neke od problema s kojima se susrećete prilikom sinteze dugog RNA.
Za in vitro transkripciju, posebno dugog RNA, potrebni su nekoliko ključnih sastojaka. Morat ćete da obezbedite enzim po imenu RNA polimeraza, materijal za pisanje u obliku nukleotidnih trifosfat (NTPs), bufer koji će pomoći reakciji i neki DNA šablon. Kako to uraditi korak po korak, detaljan vodič možete pronaći ovde:
Nekoliko činilaca je vrlo važno za dobro funkcionisanje sinteze RNA. Najznačajnije, količina magnezijum iona u samom buferu je bitna. RNA polimeraza zahteva veliku količinu magnezijuma da bi podržala pravilnu interakciju sa DNA šablonom i zatim savijanje RNA. Drugi važan aspekt koji treba uzeti u obzir je koncentracija DNA šablona. Tako specifično, morate imati dovoljno šablonskog DNA reakcije kako biste dobili dobre rezultate RNA.
Duga RNA, naravno, će sa sobom doneti i svoj skup problema. Ti problemi mogu da budu povezani sa raspadom RNA, utiču na način na koji se RNA savijaju, i formiraju strukture koje mogu da ometaju sintezu RNA. Jedan od načina za rešavanje ovih izazova jeste da se prilagodi bufer koji koristite. Da bi se postigla kompletnija struktura RNA, istraživači mogu dodati različite posebne hemijske tvari kao što su DTT i p-merkaptetanol kako bi pomogli RNA da se ispravno savije i spriječili je da se zalepi jedna za drugu ili da se grči.
Pored toga, nisu svi dugi tipovi RNA jednaki i neki mogu zahtevati alternative metode sinteze. Postoje posebne karakteristike koje istraživači mogu da dodaju u RNA, kao što je dodavanje 5' kapa ili Poli-A repa. Ako je ovo potrebno (kao što će biti objašnjeno kasnije), onda bi istraživači trebali da uključe druge enzime kao što su Guanylyltransferaza i Poli(A) Polimeraza. Takođe je potrebno izabrati odgovarajući RNA polimeraz enzim koji prirodnim načinom omogućava proizvodnju veće količine RNA. Kada je potrebno sintetizovati dugi RNA, moraćemo da utvrdimo najbolje uslove.
Dugi RNK in vitro transkript Postoji broj ključnih upotreba protokola dugog RNK in vitro transkripta u nekoliko istraživačkih, asesitivnih i terapijskih područja. Pomaga naučnicima da razumiju strukturu RNK, način njegovog funkcionišanja i kako mogu modificirati gene savremenim tehnologijama. Svakodnevno otkrivanje različitih bolesti i njihovih terapija, poput vrlo trenutnih RNK terapija, nam omogućava da vidimo koliko je ova tehnologija čitanja korisna za medicinu.
Postoji mnogo prednosti korišćenja ovog protokola. Metoda zasnovana na elektroforezi je opšte gledano najefikasniji i najekonomičniji način da se proizvede velike količine dugog RNA. Pored kvaliteta RNA, dobar iznos takođe jeste važan faktor za istraživače koji ih može pomoći u njihovim istraživanjima, posebno ako im treba velike količine RNA za eksperimente zbog visoke početne količine materijala. Takođe, in vitro transkripcija dugog RNA obično je tačnija i ponovljivija nego hemijska sinteza ili ćelijska sinteza RNA.
Yaohai BioPharma je među prvih 10 CDMO-ova za mikroorganizme koji koriste In vitro Transkripciju za dugi RNA, kao i regulativne poslove. Imamo sistem upravljanja kvalitetom koji je u skladu sa trenutnim GMP standardima i globalnim regulacijama. Naš tim stručnjaka za regulativne poslove dobro poznaje globalne regulativne okvire kako bi se ubrzala komercijalizacija bioloških proizvoda. Osiguravamo pratljive procese proizvodnje, kvalitetne proizvode, kao i pridržavanje pravilima US FDA i EU EMA. Australia TGA i Kina NMPA su takođe zadovoljni. Yaohai BioPharma je uspešno prošla na terenu audita od Stručne osobe (QP) Evropske unije za naš sistem kvaliteta prema GMP standardima i našu proizvodnu jedinicu. Pored toga, prošli smo prve certifikacione audite Sistema upravljanja kvalitetom ISO9001, Sistema upravljanja životinjskim okruženjem ISO14001 i Sistema upravljanja okupacionim zdravljem i bezbednošću ISO45001.
Yaohai Bio-Pharma, jedan od deset vodećih proizvođača bioloških proizvoda, je specijalista u mikrobijskoj fermentaciji. Izgradili smo napredne objekte opremljene savremenim tehnologijama i jačanim mogućnostima proizvodnje u razvoju i proizvodnji (RD). Imamo pet linija za proizvodnju farmaceutske tvari koje su u skladu sa GMP zahtevima za mikrobijsku fermentaciju i čišćenje, kao i dvije automatske linije za ispunjavanje kartridža, flašica i prenapunjivih šprica. Kapacitet fermentacije se kreće od 100L do 500L, 1000L i 2000L. Protok transkripcije in vitro za dugi RNA varira od 1ml do 25ml, dok specificacije za prenapunjive šprice i kartridže pokrivaju raspon od 1-3ml. Naš radionici su u skladu sa cGMP standardima i osiguravaju stalnu dostavu kliničkih uzoraka kao i komercijalnih artikala. Naša fabrika proizvodi velike molekule koje se šalju širom sveta.
Yaohai Bio-Pharma ima iskustvo u proizvodnji bioloških lekova koji se kreiraju iz mikroorganizama. Ponudili smo prilagođene RD rešenja kao i usluge proizvodnje, minimizujući potencijalne rizike. Radili smo sa različitim tehnikama, kao što su rekombinantni ćelijski podjedinki, vakcine (uključujući peptide), rastuće faktore, hormoni i Protokol za transkripciju in vitro dugog RNA-a. Specijalizirani smo u mnogim mikroorganizmima poput kvasca, ekstracelularne i intracelularne sekrecije (dohodak do 15g/L) i bakterijske intracelularne solubilnosti, te inkluzioni tijelo (dohodak do 10g/L). Razvili smo takođe BSL-2 fermentacionu platformu za stvaranje bakterijskih vakcina. Imamo historiju unapređivanja procesa proizvodnje, čime povećavamo dohodak i smanjujemo troškove. Imamo vrlo efikasan tim tehnologa koji osigurava vremensko i visokokvalitetno dostavljanje projekata. Ovo nam pomaže da vaše jedinstvene proizvode donesemo brže na tržište.
Yaohai Bio-Pharma je vodeći u oblasti in vitro transkripcije za CDMO dugih RNA-ja. Naša glavna fokusa je bila proizvodnja mikrobioloških vakcina i terapija za lične, ljudske i veterinarske zdravlje. Posedujemo najnovije tehnologije za razvoj i proizvodnju koje obuhvataju celu proizvodni proces, od inženjeringa mikrobioloških štrika, preko obrade bankova stanica i dizajna metoda do kliničke i komercijalne proizvodnje, čime osiguravamo uspešnu implementaciju najnaprednijih rešenja. Nagomilali smo ogroman količina znanja u oblasti biotehnološke obrade mikroba. Uspešno smo završili više od 200 projekata i pomažemo našim klijentima da se pridrže propisima kao što su oni američke FDA i europske EMA. Pomažemo im takođe da se orijentiraju u australijskim TGA i kineskim NMPA propisima. Zbog našeg iskustva i stručnosti, možemo brzo reagovati na tržišne potrebe i ponuditi prilagođene CDMO usluge.