Kakovostna nadzor in uporabe rekombinantnih белk

Kontrola kakovosti rekombinantnih белksov je ključna za zanesljivost in ponovljivost eksperimentalnih podatkov. Vsak korak, od načrtovanja projekta do proizvodnje, zahteva stroge strategije kontrole kakovosti.

Strategije kontrole kakovosti

Industrijski sektor pridržuje stroge standardne operacijske postopke, medtem ko akademska skupnost potrebuje povečanje strokovnih znanj za izboljšanje ponovljivosti podatkov. Beljak s posebnimi biološkimi uporabami ali biohimskimi lastnostmi zahtevajo prilagojene strategije kontrole kakovosti (QC).

Težavi in rešitve

Yaohai Bio-Pharma ima obsežno izkušnjo v proizvodnji in očiščenju rekombinantnih belksov, ter razpolaga z ekipo strokovnjakov, ki zagotavlja, da bo vaša proizvodnja belksov zaključena z visoko čistočijo. S posredovanjem izkušenj iz sto oddaj projektov pripravlja Yaohai pregled, kako optimizirati očiščevanje belksov.

Beljak, ki se vezuje na nukleinsko kisloto: Koraki odstranjevanja nukleinske kisline, kot so nukleazi ali PEI沉淀, so potrebni. Omrežje A260nm/A280nm se spremlja za zaznavo onesnaženosti s nukleinsko kislino.

Živalska Feritinovka Velika Veriga 1 za krijo-EM: Koraki očiščevanja je potrebno optimizirati in dodati nukleaze, da se zmanjša omrežje A260nm/A280nm in se zagotovi čistota proteina.

Hibridni Proteini Človeški dsRBEC: Liziranje celic uporablja bufer, ki vsebuje ureo, sledi pa kolonsko razvijanje za pridobitev funkcionalno aktivnih proteinov.

Proteini, ki se vezujejo na dvivalentne katione: Med izražanjem in očiščevanjem je treba dodati določene dvivalentne katione in se izogniti helačnim sredstvom.

Železo-Sulfur Proteini: Imidazol je treba izogibati, da se ne okvarijo [2Fe ± 2S] skupine, kar zagotavlja pravilno zlaganje in funkcijo proteina.

Raztopljiv Odlomek LLT1: Mutantni dizajn optimizira oblikovanje disulfidnih vezi in priklapljanje proteina, kar pomeni stabilne in visoko učinkovite proteine.

Krištalizacija kinaze CLK1: Skupna ekspresija z λ-fosfatazono odstrani fosfate s fospforilacijskih lokov, pri čemer se uporabljata velikostno izključujoča kromatografija (SEC) in anionska zamena za pridobitev homogenega CLK1 brez heterogenega fospforiliranja.

Proteini za uporabo kot antigeni: Ocena čistote je nujna, da se izognemo onesnaženju z visoko imunogeničnimi proteinoma. Za strukturne epitope antibodies mora biti ohranjena tri-dimenzionalna konformacija antigena.

Proteini, ki se skupajo: Uporabljajo se strategije, kot je preskus različnih štrank in zmanjšanje kultivacijskih temperatur, da se omeji problem skupanja, ter so načrtovane hitre metode počiščevanja.

Odstranitev endotoksinov: Metode, kot je pozitivno nabojna kromatografija in afiniteta polianonskih vezov, odstranijo endotoksine, tako da so ravni LPS spodaj aplikacijskih meja.

Kompleksi proteinov: Podenote so izražene posebej in sestavljene v vitro ali skupaj izražene, da oblikujejo funkcionalne komplekse. Celovitost kompleksa se oceni po homogenosti in molarni masi.

Zaključek

Proizvodnja beljakovin začne z strategskim načrtovanjem, pri čemer upoštevamo biokemijske lastnosti in uporabe. Med izražanjem, očiscenjem in kakovostnim nadzorom so pogoji in metode prilagojeni za stabilnost, neagregacijo in naravno stanje. Očiščene beljakovine služijo različnim nadaljnim uporabam, kot je bi fizikalna karakterizacija.

Yaohai Bio-Pharma aktivno išče tudi institucionalne ali posamezne globalne partnerje in ponuja najbolj konkurenčno nakazilo v industriji. Če imate katere koli vprašanje, prosimo, da nas kontaktirate: [email protected]