Odhalovanie tajomstiev vysokokvalitnej extrakcie plazmidov

Extrakcia plazmidov je kľúčová pre výskumníkov. ako genové vektory sú plazmity nevyhnutné v rozvoji vakcín a genovej terapii, kde má zmysel kvalita. Kľúčové faktory kvality zahŕňajú úväzok supercoil a obsah endotoxínov. Predpisy sa líšia: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, pri menej ako 5% lineárneho/otvoreného cirkulárneho DNA. Zákaznici často preferujú ≥95% supercoil. Úrovne endotoxínov sú: výskum (>50 EU/µg), transfekcia (<50 EU/µg) a bez endotoxínov (<0.1 EU/µg).

Supercoil plazmidová DNA

Plazmidy z Escherichia coli zahŕňajú supercoil (SC), otvorený cirkulárny (OC) a lineárny (L) DNA. Vysoký podiel SC zvyšuje účinnosť transfekcie a expresiu. Napríklad, transfeckcia plazmidu so 85,45% SC je o 2,5x vyššia, a expresia HGF plazmidu so 93,28% SC je o 1,8x vyššia, čo potvrdzuje prednosť SC DNA.

Otvorená-kruhová DNA: Keď sa preruší jedna vlákna dvojvlákňovej DNA, superzakrivená štruktúra sa uvoľní, čo vytvorí otvorený kruhový plazmid s väčším objemom, ktorý sa počas elektroforeze pohybuje najpomaly a nachádza sa navrchu.

Lineárna DNA: Keď sa preruší obe vlákna plazmidovej DNA, vznikne lineárna štruktúra s relatívne menším objemom, ktorá sa pohybuje rýchlejšie ako otvorená-kruhová DNA, ale pomalšie ako superzakrivená DNA, nachádza sa na druhom mieste.

Superzakrivená DNA: Dve heliksy sa preplietajú, zakrивujúc sa do superzakrivenej štruktúry založenej na DNA helixe. Má najmenší objem a počas elektroforezy sa pohybuje najrýchlejšie, nachádza sa dole.

Kvantitatívna analýza úbytku superzakriveného stavu

V laboratóriách sa používa agárovodnátrova elektroforeza (AGE) a Gel-Pro Analyzer na posudzovanie podielu superzakriveného stavu pomocou obrazov elektroforezy. Jeden obraz ukazuje 97,539 % SC DNA, zatiaľ čo druhý obraz ukazuje 63,833 % SC a 36,167 % OC DNA (lineárna DNA nie je viditeľná).

Tajomstvo endotoxín v plazmidoch

Endotoxín je komponentou vonkajšej vrstvy bunčnej steny gramnegatívnych bakterií, ktorá sa uvoľní po bakteriálnej smrti alebo lyze a obsahuje toxické lipopolysacharid A. Počas extrakcie plazmidu sa endotoxín dostane do lyzátneho riešiva, čo ovplyvňuje účinnosť transfekcie a spúšťa nespecifické imunitné odpovede, čo môže viesť k falošným pozitívnym výsledkom v experimentoch.

Kvantitatívna a kvalitatívna analýza endotoxínu

Test Limulus amebocyte lysate (LAL) detekuje endotoxín aglutináciou s 2-keto-3-deoxyoktovou kyselinou (KDO) v lipopolysacharide (LPS). Je to kvalitatívna a polokvantitatívna metóda, ktorá ukazuje prítomnosť endotoxínu cez zchladnutie alebo zmenу farby po zmiešaní s vzorkami.

Yaohai Bio-Pharma ponúka plazmidy vo supercoilovej forme bez endotoxínu. Zamestnanie služieb Yaohai zvyšuje účinnosť transfekcie a expresie. Dostavované plazmidy majú proporciu ≥95% SC (priemer 85%±10%) a hladinu endotoxínu ≤0.1, ≤0.01 alebo ≤0.005 EU/μg.

Hľadáme tiež aktívne globálnych partnerov, či už institucionálnych alebo jednotlivcov. Ponúkame najkonkurenceschopnejšie odškodnenie v odvetví. Ak máte akékoľvek otázky, neváhejte nás kontaktovať: [email protected]