Dnes je pre Yaohai tak isté vzrušujúce podeliť sa o svoj protokol in vitro transkripcie pre dlhé RNA. Je to efektívna stratégia, ktorú vedeckí pracovníci často používajú na produkciu RNA v laboratóriu. Týmto spôsobom môžu výskumníci vyrobiť významne veľké množstvo dlhých RNA – niečo, čo je nevyhnutné pre štúdium v rôznych biologických oblastiach. Tu poskytujeme postupný návod na prípravu dlhých RNA pomocou in vitro transkripcie. Hovorili sme aj o tom, ako môžeme proces zlepšiť a pokúsime sa vyriešiť niektoré z problémov, s ktorými sa stretávate pri syntéze dlhých RNA.
Pre in vitro transkripciu, osobitne pre dlhé RNA, sú potrebné niekoľko základných komponentov. Musíte mať enzym nazvaný RNA polymeráza, písacie materiály v tvare nukleotidových trifosfátov (NTP) a buffér na podporu reakcie, a tiež niektoré DNA šablóny. Ako to urobiť krok za krokom, detailný návod nájdete tu:
Niekoľko faktorov je veľmi dôležitých pre úspešné fungovanie syntézy RNA. Najmä množstvo magneziových íonov vo vlastnom buffere je dôležité. RNA polymeráza vyžaduje veľké množstvo magnezia na podporu správneho vzájomného pôsobenia s DNA šablónou a následného zloženia RNA. Druhým dôležitým aspektom, ktorý treba zvážiť, je koncentrácia DNA šablóny. Konkrétne musíte mať dostatočne veľa šablónovej DNA v reakcii, aby ste dosiahli dobré výnosy RNA.
Dlhé RNA samozrejme prídu so svojou súborom problémov. Tieto problémy môžu byť spojené s rozkladom RNA, môžu ovplyvniť spôsob, ako sa RNA zloží, a vytvárať štruktúry, ktoré môžu interferovať s syntézou RNA. Jedným spôsobom, ako tieto výzvy riešiť, je úprava buffera, ktorý použijete. Pre komplexnejšiu štruktúru RNA môžu výskumnici pridať rôzne špeciálne chemikálie, ako je DTT a p-merkaptetanol, aby pomohli RNA sa správne zložiť a zabránili jej, aby sa lepila alebo skupinila.
Navíc nie sú všetky druhy dlhých RNA rovnaké a niektoré môžu vyžadovať alternatívne metódy syntézy. Existujú špeciálne vlastnosti, ktoré výskumníci môžu potrebovať pridať do RNA, ako napríklad pridanie 5' kapky alebo Poly-A chvostu. Ak je to potrebné (ako je vysvetlené neskôr), výskumníci by mali zahrnúť ďalšie enzymy, ako je Guanylyltransferáza a Poly(A) Polymeráza. Musí sa tiež vybrať primeraný enzym RNA polymerázy, ktorý im prirodzeno umožní produkovať viac RNA. Hneď keď sa má dlhá RNA syntetizovať, bude potrebné určiť najlepšie podmienky.
Dlhé RNA in vitro transkripty Má dlhý RNA in vitro transkriptný protokol niekoľko kľúčových použití v rôznych vedeckých, diagnostických a terapeutických oblastiach. Pomáha vedeckým pracovníkom pochopiť štruktúru RNA, spôsob jej funkcionality a ako môžu modifikovať gény s pomocou súčasných technológií. Každý deň sa objavujú nové poznatky o rôznych ochoreniach a ich terapiách, ako napríklad aktuálne RNA terapie, čo nám ukazuje, aké užitočné je toto čítanie-v-technológia pre medicínu.
Používanie tohto protokolu má mnoho výhod. Metóda založená na elektroforeze je obvykle najefektívnejšia a najekonomičnejšia spôsob, ako vyrobiť veľké množstvo dlhého RNA. Okrem kvality RNA je aj dobrá výnosnosť dôležitým faktorom pre výskumníkov, ktorí im môžu pomôcť s ich výskumom, osobitne ak potrebujú veľké množstvo RNA pre experimenty kvôli vysokému počtu vstupného materiálu na začiatku. navyše, in vitro transkripcia pre dlhé RNA je typicky presnejšia a reprodukovateľnejšia ako chemicálna syntéza alebo bunková syntéza RNA.
Yaohai BioPharma je medzi top 10 mikrobiologickymi CDMO spoločnosťami, ktoré využívajú In vitro Transcript Protocol pre dlhé RNA a tiež sa zaoberajú regulačnými vecami. Máme systém riadenia kvality, ktorý je v súlade s aktuálnymi GMP štandardmi a globálnymi reguláciami. Náš tím odborníkov na regulačné veci má skúsenosti s globálnymi regulačnými rámci na akceleráciu biologických výrobkov. Zabezpečujeme sledovateľné produkčné procesy, kvalitné produkty a dodržiavanie pravidiel US FDA a EU EMA. Australia TGA a China NMPA sú tiež spokojné. Yaohai BioPharma úspešne prešla revíziou na mieste od Kvalifikovanej Osoby (QP) Európskej únie pre náš systém kvality podľa GMP a našu produkčnú závodu. navyše sme prešli prvými certifikačnými audítami Systému Riadenia Kvality ISO9001, Systému Riadenia Prostredia ISO14001 a Systému Riadenia Zdravia a Bezpečnosti pri Práci ISO45001.
Yaohai Bio-Pharma, jedna z desať najväčších výrobcov biologických produktov, je odborník na mikrobiálnu fermentáciu. Vytvorili sme moderné zařadenie vybavené súčasnými technológiami a silnými schopnosťami výskumu a vývoja (RD) a výroby. Máme päť výrobných lín pre látky liečiv, ktoré sú v súlade so požiadavkami GMP pre mikrobiálnu fermentáciu a čistenie, a ďalšie dve automatizované línove pre naplnovanie kartridžov, fiolk a prednaplnených šypô. Rozsah fermentácie sa pohybuje od 100L po 500L, 1000L a 2000L. Protokol in vitro transkripcie pre dlhé RNA pre viasy je od 1ml po 25ml, zatiaľ čo špecifikácie pre prednaplnené šypky a kartridže pokrývajú objemy od 1-3ml. Náš výrobný pracovisko je v súlade s cGMP a zabezpečuje stabilné dodávky klinických vzoriek aj komerčných položiek. Náš závod vyrábňa veľké molekuly, ktoré sú dodávané po celom svete.
Yaohai Bio-Pharma má zkušenosti v výrobe biologických látek, ktoré sú vyvíjané z mikroorganizmov. Ponúkame na mieru štandardizované RD riešenia a služby výroby pri minimizácii potenciálnych rizík. Pracovali sme s rôznymi technológiami, ako sú rekombinantné bunkové podjednotky, vakcíny (vrátane peptidov), rastové faktory, hormóny a Protokolom pre Transkripciu in vitro dlhých RNA. Som odborníkom na mnoho mikroorganizmov, ako je kvasinky extracellular a intracellular sekretácia (výnos až 15g/L) a baktériá intracellular rozpustné a inklúziové telieska (výnos až 10g/L). Rozvinuli sme tiež platformu fermentácie BSL-2 na vytvorenie baktériových vakcín. Máme historické údaje o zlepšovaní produkčných procesov, čím sa zvyšujú výnosy a snižujú sa náklady. Máme veľmi efektívny technologický tímu na istotu a vysokú kvalitu dodávky projektov. To nám pomáha privedieť vaše jedinečné produkty rýchlejšie na trh.
Yaohai Bio-Pharma je vodcom v oblasti in vitro transkripcijného protokolu pre dlhé RNA CDMO. Našou hlavnou pozornosťou bolo výrobné zaistenie mikrobiálnych vakcín a liečiv na léčbu domácich zvierat, ľudí a veterinárneho zdravia. Majúme moderné výskumné a výrobné technologické platformy, ktoré pokrývajú celý výrobný proces od inžinierskeho navrhovania mikrobiálnych štriek, cez spracovanie bunkových bank a návrh metód po klinickej a komerčnej výrobe, čo nám umožňuje zabezpečiť úspešné dodanie najpokročilejších riešení. Získaли sme obrovské množstvo poznatkov v oblasti bioprocessingu mikroorganizmov. Viac ako 200 projektov bolo úspešne dokončených a pomáhame našim klientom plniť právne predpisy, ako sú tie US FDA aj EÚ EMA. Pomáhame im tiež orientovať sa v australskom TGA a čínskom NMPA. Gracias ku svojmu skúsenosti a odbornostiam dokážeme rýchlo reagovať na trhové požiadavky a ponúkať prispôsobené CDMO služby.