Сегодня Яохай с энтузиазмом делится своим протоколом транскрипции in vitro для длинных РНК. Это эффективная стратегия, которую ученые часто используют для производства РНК в лаборатории. С помощью этого метода исследователи могут получить значительное количество длинных РНК — что является ключевым для изучения различных биологических областей. Здесь мы предоставляем пошаговое руководство по подготовке длинных РНК через транскрипцию in vitro. Мы также обсудим, как можно улучшить процесс и попытаемся решить некоторые проблемы, с которыми вы сталкиваетесь при синтезе длинной РНК.
Для транскрипции in vitro, особенно для длинной РНК, требуются несколько основных компонентов. Вам понадобится фермент под названием РНК-полимераза, «материал для записи» в виде нуклеозидтрифосфатов (NTP), буфер для поддержки реакции и некоторый ДНК-шаблон. Как это сделать пошагово, подробное руководство можно найти здесь:
Несколько факторов очень важны для успешного синтеза РНК. Прежде всего, количество магниевых ионов в буфере само по себе важно. РНК-полимераза требует значительного количества магния для правильного взаимодействия с ДНК-матрицей и последующего складывания РНК. Вторым важным аспектом, который следует учитывать, является концентрация ДНК-шаблона. Конкретно, необходимо иметь достаточное количество шаблонной ДНК в реакции, чтобы получить хорошие выходы РНК.
Длинная РНК, конечно же, будет сопровождаться своим набором проблем. Эти проблемы могут быть связаны с распадом РНК, влиять на то, как РНК складывается, и создавать структуры, которые потенциально могут мешать синтезу РНК. Одним из способов решения этих задач является изменение буфера, который вы используете. Для более полной структуры РНК исследователи могут добавлять различные специальные химические вещества, такие как ДТТ и п-меркаптоэтанол, чтобы помочь РНК правильно складываться и предотвратить её слипание или образование комков.
Кроме того, не все виды длинных РНК одинаковы, и некоторые могут требовать альтернативных методов синтеза. Существуют специфические особенности, которые исследователям может потребоваться добавить в РНК, например, добавление 5'-шапочки или поли-A хвоста. Если это необходимо (как объясняется далее), то исследователи должны включить другие ферменты, такие как гуанилтрансфераза и поли(A)-полимераза. Также необходимо выбрать подходящий фермент РНК-полимеразы, который естественным образом позволяет им производить больше РНК. Как только требуется синтез длинной РНК, нам нужно будет определить лучшие условия для этого.
Длинные РНК in vitro транскрипт. Существует ряд ключевых применений протокола in vitro транскрипции длинной РНК в различных исследованиях, тестах и терапевтических направлениях. Это помогает ученым понять структуру РНК, принцип ее работы и способы модификации генов с использованием современных технологий. Каждый день появляются новые открытия в области различных заболеваний и их терапии, например, современные РНК-терапии, что подтверждает полезность этой технологии для медицины.
Использование этого протокола имеет множество преимуществ. Метод на основе электрофореза, как правило, является наиболее эффективным и экономически выгодным способом производства больших количеств длинной РНК. Помимо качества РНК, хороший выход также является важным фактором для исследователей, помогая им в их работе, особенно если им требуется большое количество РНК для экспериментов из-за высокой начальной концентрации материала. Кроме того, транскрипция in vitro для длинной РНК обычно более точна и воспроизводима, чем химическое синтезирование или клеточное синтезирование РНК.
Yaohai BioPharma — одна из ведущих десяти CDMO в области микробиологии, которая использует протокол In vitro Transcript для длинного РНК, а также занимается регуляторными вопросами. У нас есть система управления качеством, соответствующая современным стандартам GMP и глобальным нормативным требованиям. Наша команда экспертов по регулированию хорошо знакома с глобальными регуляторными рамками для ускорения запуска биопрепаратов. Мы гарантируем прослеживаемость производственных процессов, качество продукции и соблюдение правил FDA США и EMA ЕС. Регулирующие органы Австралии TGA и Китая NMPA также удовлетворены. Yaohai BioPharma успешно прошла проверку на месте квалифицированным лицом (QP) Европейского союза для нашей системы качества GMP и производственных мощностей. Кроме того, мы успешно прошли первые сертификационные аудиты систем менеджмента качества ISO9001, экологического менеджмента ISO14001 и охраны труда и здоровья ISO45001.
Yaohai Bio-Pharma, один из десяти ведущих производителей биопродуктов, является специалистом в области микробиологической ферментации. Мы создали передовое производство, оснащенное современным оборудованием и обладающее сильными возможностями производства в области НИОКР. У нас есть пять линий по производству активных фармацевтических ингредиентов, соответствующих требованиям GMP для микробиологической ферментации и очистки, а также две автоматизированные линии розлива для картриджей, флаконов и шприцев с предварительно наполненными дозами. Масштабы ферментации варьируются от 100 до 500, 1000 и 2000 литров. Протокол транскрипции in vitro для длинной РНК для флаконов составляет от 1 мл до 25 мл, тогда как спецификации наполнения предварительно наполненных шприцев и картриджей охватывают объемы от 1 до 3 мл. Наше производственное подразделение соответствует стандартам cGMP и гарантирует стабильную поставку клинических образцов и коммерческих продуктов. На нашем заводе производятся большие молекулы, которые поставляются во всем мире.
Yaohai Bio-Pharma имеет опыт в производстве биопрепаратов, создаваемых из микроорганизмов. Мы предлагаем индивидуальные решения в области НИОКР, а также услуги по производству с минимизацией потенциальных рисков. Мы работали с различными технологиями, такими как рекомбинантные клеточные субъединицы, вакцины (включая пептиды), факторы роста, гормоны и протокол In vitro для транскрипции длинного РНК. Мы являемся специалистами во многих микроорганизмах, таких как внеклеточная и внутриклеточная секреция дрожжей (доходность до 15 г/л) и внутриклеточная растворимость бактерий, а также инклюзионные тела (доходность до 10 г/л). Мы также разработали платформу ферментации BSL-2 для создания бактериальных вакцин. У нас есть успешный опыт улучшения производственных процессов, что позволяет увеличить выход продукции и снизить затраты. У нас есть высокоэффективная техническая команда, которая обеспечивает своевременную и качественную доставку проектов. Это помогает нам быстрее выводить на рынок ваши уникальные продукты.
Yaohai Bio-Pharma является лидером в области протоколов транскрипции in vitro для длинного РНК CDMO. Основное внимание мы уделяем производству микробных вакцин и терапевтических средств для лечения домашних животных, человека и ветеринарного здоровья. У нас есть передовые технологии разработки и производства, охватывающие весь процесс производства — от инженерного проектирования микробных штаммов до обработки клеточных банков и разработки методов, а также клинического и коммерческого производства, что гарантирует успешную доставку самых современных решений. Мы накопили огромный объем знаний в области биообработки микроорганизмов. Более 200 проектов были успешно завершены, и мы помогаем нашим клиентам соответствовать нормативным требованиям, таким как у US FDA и EU EMA. Мы также помогаем им ориентироваться в требованиях Australia TGA и China NMPA. Благодаря нашему опыту и компетенциям, мы можем быстро реагировать на рыночные потребности и предлагать индивидуальные услуги CDMO.