Astăzi, Yaohai este atât de entuziasmat să împartă protocolul său de transcripție in vitro pentru RNA lung. Este o strategie eficientă pe care o folosesc cercetătorii frecvent pentru a produce RNA în laborator. În acest mod, cercetătorii pot produce un număr semnificativ mai mare de RNA-uri lungi - ceva esențial pentru studierea în diferite domenii biologice. Aici oferim un ghid pas cu pas pentru pregătirea RNA-urilor lungi prin transcripție in vitro. Vom vorbi și despre cum putem îmbunătăți procesul și vom încerca să abordăm unele dintre problemele cu care vă confruntați în sinteza RNA-ului lung.
Sunt necesare câteva componente esențiale pentru transcripția in vitro, în special pentru RNA lung. Veți trebui să furnizați un enzyme denumit polimerază RNA, materiale de scriere sub forma de nucleotide trifosfat (NTP-uri), un buffer pentru a ajuta la reacție și un anumit șablon DNA. Cum să procedați pașiv-pașiv, puteți găsi un ghid detaliat aici:
Câteva factori sunt foarte importanți pentru funcționarea corectă a sintezei RNA. Cel mai notabil, cantitatea de ioni magneziu din buffer este importantă. Polimeraza RNA necesită o cantitate semnificativă de Magneziu pentru a susține o interacțiune corespunzătoare cu șablonul DNA și ulterior plierea RNA-ului. Un al doilea aspect important de luat în considerare este concentrația șablonului DNA. Mai exact, trebuie să aveți suficient DNA șablon în reacție pentru a obține rendamente bune de RNA.
Lunga RNA, desigur, va veni cu propriul său set de probleme. Aceste probleme pot fi legate de descompunerea RNA-ului, să affecteze modul în care RNA se pliază și să formeze structuri care pot să interfețeze cu sintetizarea RNA-ului. Un mod de a aborda aceste provocări este prin ajustarea buffer-ului pe care îl folosiți. Pentru o structură mai comprehensivă a RNA-ului, cercetătorii pot adăuga diferite substanțe chimice speciale, cum ar fi DTT și p-mercaptoetanol, pentru a ajuta RNA să se plieze corect și să înlăture riscul ca aceasta să se lipsească sau să se aglomereze.
În plus, nu toate tipurile de RNA lungi sunt la fel și unele ar putea cere metode alternative de sinteză. Există caracteristici speciale pe care cercetătorii le-ar putea dori să le adauge în RNA, cum ar fi adăugarea unui cap 5 sau a unei cozi Poly-A. Dacă acest lucru este necesar (așa cum se explică mai târziu), cercetătorii ar trebui să includă alte enzyme, cum ar fi Guanylyltransferase și Poly(A) Polymerase. Trebuie, de asemenea, să se aleagă o enzymă polymerază RNA potrivită, care să permită producerea naturală a unei cantități mai mari de RNA. Deși, atunci când RNA-ul lung trebuie sintetizat, vom trebui să identificăm cele mai bune condiții.
Transcrierea in vitro a RNAs lungi Are un număr de utilizări cheie ale protocolului de transcriere in vitro a RNA-urilor lungi într-o serie de cercetări, teste și abordări terapeutice. Acesta ajută savanții să înțeleagă structura RNA-ului, modul în care acesta funcționează și cum pot modifica genele folosind tehnologii contemporane. De zi în zi, descoperirea diferitelor boli și a terapiilor lor, precum terapiile cu RNA foarte actuale, ne arată cât de utilă poate fi această tehnologie de citire pentru medicină.
Există multe avantaje legate de utilizarea acestei protocoale. O metodă bazată pe electrofoză este, în general, cel mai eficient și costurilor mod de a produce cantități mari de RNA lung. Pe lângă calitatea RNA, un rendement bun este, de asemenea, un factor important pentru cercetători, care îi ajută în cercetare, mai ales dacă au nevoie de cantități mari de RNA pentru experimente, din cauza materialelor de intrare ridicate necesare inițial. În plus, transcripția in vitro pentru RNA lung este, de obicei, mai precisă și reproducibilă decât sinteza chimică sau sinteza celulară a RNA.
Yaohai BioPharma este un CDMO Microbial din topul 10 care integrează Protocolul de Transcripție In vitro pentru RNA Lung, precum și afaceri regulate. Avem un sistem de management al calității care este în conformitate cu standardele GMP actuale, precum și cu regulile globale. Echipa noastră de experți în reglementări este experimentată în cadrul reglementărilor globale pentru a accelera lansările biologice. Ne asigurăm procese de producție urmărite, produse de calitate, precum și respectarea regulilor US FDA și EU EMA. Australia TGA și China NMPA sunt de asemenea satisfăcute. Yaohai BioPharma a trecut cu succes auditul pe loc de muncă al Persoanei Calificate (QP) a Uniunii Europene pentru sistemul nostru de calitate GMP și instalația de producție. Mai mult, am trecut primele certificări de audit ale Sistemului de Management al Calității ISO9001, Sistemului de Management al Mediului ISO14001 și Sistemului de Management al Sănătății și Siguranței Ocupaționale ISO45001.
Yaohai Bio-Pharma, unul dintre cei mai importanți 10 producători de produse biologice, este specializat în fermentarea microbială. Am creat o facilitate modernă, echipată cu tehnologie avansată și capacități puternice de fabricație RD. Deținem cinci linii de producție de substanțe medicale care respectă cerințele GMP pentru fermentare și purificare microbienă, precum și două linii automate de umplere pentru cartușe, vase și seringi preumplute. Scara de fermentare variază între 100L și 500L, 1000L și 2000L. Protocolul de Transcripție in vitro pentru RNA lung are specificații de la 1ml la 25ml, în timp ce specificațiile de umplere a seringelor preumplute și cartușelor acoperă volumul de la 1-3ml. Ateliul nostru de producție este conform normelor cGMP și asigură o furnizare constantă a esențelor clinice și a produselor comerciale. Fabrica noastră produce molecule mari care sunt expediate în întreaga lume.
Yaohai Bio-Pharma are experiență în producerea de biologice create din microorganisme. Ofertăm soluții personalizate de RD precum și servicii de producție, minimizând în același timp riscurile potențiale. Am lucrat cu tehnici diverse, cum ar fi subunitățile celulare recombinate, vaccinuri (inclusiv peptide), factori de creștere, hormoni și Protocolul de Transcripție In vitro pentru RNA Lung. Suntem specialiști în multe microorganisme, cum ar fi secreția extracelulară și intracelulară a levurii (rendiment până la 15g/L) și soluble intracelulară a bacteriilor, inclusiv corpuri de incluziune (rendiment până la 10g/L). Am dezvoltat de asemenea o platformă de fermentație BSL-2 pentru a crea vaccinuri bacteriene. Avem un portofoliu de îmbunătățire a proceselor de producție, ceea ce crește rendimentele și reduce costurile. Disponem de o echipă tehnică foarte eficientă care să asigure livrarea proiectelor în termen și cu calitate ridicată. Acest lucru ne ajută să aducem produsele dvs. unice mai repede pe piață.
Yaohai Bio-Pharma este un lider în protocoalele de transcripție in vitro pentru CDMO RNA lung. Principala noastră direcție a fost producerea de vaccinuri și terapii microbiene pentru sănătatea animalelor de companie, a oamenilor și a veterinarii. Deținem platforme de tehnologie avansată RD și de fabricație care acoperă întregul proces de fabricație, de la ingineriașirea microbială, până la procesarea bancilor de celule și proiectarea metodelor, trecând prin fabricația clinică și comercială, asigurând astfel că putem garanta livrarea cu succes a celor mai avansate soluții. Am acumulat o cantitate mare de cunoștințe în domeniul procesării biologice microbiene. Peste 200 de proiecte au fost finalizate cu succes și ajutăm clienții noștri să se conformeze regulamentelor, cum ar fi cele ale US FDA și EU EMA. De asemenea, îi ajutăm să navigheze prin reglementările Australia TGA și China NMPA. Datorită experienței și expertizei noastre, putem răspunde rapid la cerințele pieței și oferim servicii personalizate CDMO.