Controle de Qualidade e Aplicações de Proteínas Recombinantes

O controle de qualidade de proteínas recombinantes é crucial para a confiabilidade e reprodutibilidade dos dados experimentais. Cada etapa, desde o design do projeto até o processo de produção, exige estratégias rigorosas de controle de qualidade.

Estratégias de Controle de Qualidade

O setor industrial adere a procedimentos operacionais padrão rigorosos, enquanto a comunidade acadêmica precisa melhorar o conhecimento profissional para melhorar a reprodutibilidade dos dados. Proteínas com aplicações biológicas específicas ou características bioquímicas requerem estratégias personalizadas de controle de qualidade (QC).

Exemplos Desafiadores e Soluções

A Yaohai Bio-Pharma possui ampla experiência em produção e purificação de proteínas recombinantes, além de uma equipe de especialistas, garantindo que sua produção de proteínas seja concluída com alta pureza. Com base na nossa experiência em centenas de projetos, a Yaohai gentilmente resume como otimizar a purificação de proteínas.

Proteínas de Ligação a Ácidos Nucleicos: Etapas de remoção de ácido nucleico, como nucleases ou precipitação com PEI, são necessárias. A razão A260nm/A280nm é monitorada para detectar contaminação por ácido nucleico.

Feritina Cadeia Pesada de Camundongo para cryo-EM: As etapas de purificação precisam ser otimizadas, e nucleases precisam ser adicionadas para reduzir a razão A260nm/A280nm e garantir a pureza da proteína.

Proteína Quimérica Humana dsRBEC: A lise celular utiliza um buffer contendo ureia, seguido por refoldamento em coluna para obter proteínas funcionalmente ativas.

Proteínas que se Ligam a Cátions Divalentes: Cátions divalentes específicos devem ser adicionados durante a expressão e purificação, e agentes quelantes devem ser evitados.

Proteínas de Ferro-Azoto: O imidazol deve ser evitado para prevenir a perturbação do cluster [2Fe ± 2S], garantindo a correção do dobramento e função da proteína.

Fragmento Solúvel de LLT1: O design mutante otimiza a formação de ligações dissulfeto e o dobramento de proteínas, resultando em proteínas estáveis e de alta produtividade.

Cristalização da Quinase CLK1: Co-expressão com fosfatase λ remove fosfatos dos sítios de fosforilação, e cromatografia de exclusão de tamanho (SEC) e cromatografia de troca iônica são usadas para obter um CLK1 homogêneo sem fosforilação heterogênea.

Proteínas para Uso como Antígenos: A avaliação de pureza é necessária para evitar contaminação com proteínas altamente imunogênicas. Para anticorpos de epitopo estrutural, a conformação tridimensional do antígeno deve ser mantida.

Proteínas Suscetíveis à Agregação: Estratégias como triagem de diferentes cepas e redução das temperaturas de cultivo são empregadas para limitar problemas de agregação, e estratégias de purificação rápida são projetadas.

Remoção de Endotoxinas: Métodos como cromatografia de carga positiva e cromatografia de afinidade com ligante policationico removem endotoxinas, garantindo que os níveis de LPS estejam abaixo dos limites de aplicação.

Complexos de Proteínas: As subunidades são expressas separadamente e montadas in vitro ou co-expressas para formar complexos funcionais. A integridade do complexo é avaliada pela homogeneidade e massa molar.

Conclusão

A produção de proteínas começa com um design estratégico, considerando características bioquímicas e aplicações. Durante a expressão, purificação e controle de qualidade, as condições e métodos são otimizados para estabilidade, não-agregação e estado nativo. As proteínas purificadas servem para diversos usos downstream, como caracterização biofísica.

Yaohai Bio-Pharma também está ativamente buscando parceiros globais institucionais ou individuais e oferece a compensação mais competitiva do setor. Se tiver alguma dúvida, sinta-se à vontade para nos contatar: [email protected]