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Purificação de circRNA baseada em HPLC

RNA circular, ou circRNA, é um tipo específico de RNA que tem uma forma diferente. Enquanto o RNA normal tem uma aparência linear em linha reta, a circRNA é em formato de loop. As circRNAs — um tipo cuja estrutura é crucial porque geralmente se revelam abundantes e participam de muitos processos celulares importantes. Por um lado, elas regulam como nossos genes são expressos, o que pode influenciar desde os padrões de crescimento do nosso corpo até como respondemos às doenças. As circRNAs são de grande interesse para os cientistas; uma compreensão melhor delas pode revelar como as doenças se desenvolvem e identificar abordagens terapêuticas inovadoras. Mas há um problema: as circRNAs são muito pequenas e tendem a estar presentes em quantidades muito baixas nas amostras estudadas pelos cientistas. Isso torna desafiador obter circRNA suficiente para pesquisa.

Antes da fundação definitiva ser estabelecida para coletar circRNA, um método bem estabelecido chamado Cromatografia Líquida de Alta Performance, ou HPLC em resumo, foi utilizado. A HPLC é uma técnica versátil usada para separar várias moléculas com base em suas características físicas e químicas. Ela opera separando moléculas com base no tamanho e forma. Como os circRNAs são muito pequenos, eles podem ser facilmente perdidos entre as milhares de outras moléculas em uma amostra. Isso significa que os circRNAs podem ser separados de outros RNAs, proteínas e detritos exógenos que podem ter sido incluídos na amostra usando métodos eficazes como a cromatografia de exclusão por tamanho (SEC), uma técnica de HPLC. É uma separação importante para cientistas que precisam isolar o circRNA para sua pesquisa.

Isolamento de circRNA baseado em HPLC para análise precisa downstream

Assim que a HPLC auxilia na purificação do circRNA, ela deve ser analisada minuciosamente por cientistas para entender suas funções em nós. Os circRNAs surgiram como moléculas importantes envolvidas em múltiplas funções biológicas, tornando um entendimento abrangente dos diversos tipos e papéis de circRNA crítico para decifrar sua participação em diversas doenças. Cientistas não conhecem a sequência do circRNA purificado e precisarão dela para descobrir as funções desses papéis. Para isso, eles utilizam técnicas como PCR reversa (RT-PCR). Com RT-PCR, os cientistas fazem cópias adicionais do circRNA para que possam estudá-lo de forma mais específica. Eles são frequentemente informativos, fornecendo informações sobre como essas moléculas funcionam e o que fazem em nossas células, ao analisar as sequências de circRNA.

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