Optymalizacja procesu oczyszczania insulin ludzkich rekombinacyjnych

W ostatnich latach wzrost liczby pacjentów z cukrzycą spowodował wzrost popytu na insuline, ale tania insulina jest w krótkiej dostawie. Efektywna i ekonomiczna produkcja insuliny jest kluczowa. Produkuje się ją przede wszystkim za pomocą Escherichia coli (E. coli) i drożdży ze względu na szybki wzrost i niski koszt, jednak E. coli wymaga skomplikowanej obróbki w procesach dalszych.

Przegląd procesu dalszego:

Czyszczenie rekombinacyjnej insuliny ludzkiej z inkluzji E. coli obejmuje wiele etapów, w tym odzyskiwanie, mycie, roztapiaanie i utlenianie, rozcinanie, wymiana buforu, chromatograficzne czyszczenie, osadzanie, renaturację, enzymatyczne rozcinanie oraz formułowanie.

Yaohai Bio-Pharma dysponuje szerokim doświadczeniem w produkcji i czyszczeniu rekombinacyjnej insuliny, a także zespołem ekspertów, co gwarantuje wysoce efektywną produkcję insuliny. Korzystając z doświadczenia zdobytego w setkach projektów, Yaohai uprzejmie podsumowuje, jak zoptymalizować proces dalszego czyszczenia rekombinacyjnej insuliny ludzkiej.

Odzyskiwanie i mycie ciał inkluzyjnych:

Komórki są przerabiane za pomocą metod mechanicznych (takich jak ultrafalkacja, homogenizacja wysokociśnieniowa) lub leczenie lysozymem, po którym następuje mycie buforami (zawierającymi ureę, Triton X-100 itp.), aby usunąć nieczystości. Podczas mycia parametry muszą zostać zoptymalizowane, aby zapewnić jakość białek przy jednoczesnym kontrolowaniu kosztów.

Zaprawianie i oksydacja ciał inkluzyjnych:

Używane są wysokie stężenia denaturantów (takich jak chlorowodór glicyny i urea), aby zrozpuszczać ciała inkluzyjne, dodając dithiothreitol lub β-merkaptetanol, aby zapobiec powstaniu błędnych wiązań disulfidowych. pH i temperatura mają istotny wpływ na reakcje zaprawiania i oksydacji.

Klejenie i wymiana bufora:

Użycie bromku cyjanu służy do usuwania początkowego aminokwasu N-terminalowego, ale wiąże się to z problemami toksyczności i niskiej specyficzności. Poprzez dializę, ultrafiltrację lub chromatografię rozdzielczą wymiana buforu usuwa szkodliwe reagenckie w przygotowaniu do kolejnych operacji.

Czyszczenie chromatograficzne i osadzanie:

Zastosowanie wielu technik chromatograficznych służy do oczyszczania insuliny, w tym chromatografia afinicyna, chromatografia jonowa, chromatografia fazą odwróconą, chromatografia oddziaływaniem hydrofobowym oraz chromatografia rozdzielcza według rozmiaru. Metody osadzania, takie jak osadzanie przez pH i krystalizacja cynkowa, są stosowane do usuwania nieczystości i koncentracji białek.

Renaturacja:

Białek rozpuszczony jest rozcieńczany w buforze renaturującym w celu promowania poprawnej formacji wiązań disulfidowych i fałdowania białka. Chromatografia ciekła fałdowania białka i dializa są również metodami stosowanymi do renaturacji.

Klejenie enzymatyczne i formułowanie:

Trypsyna i karboksypeptydaza B są wykorzystywane do odcięcia peptydu C, tworząc aktywny heterodimer insuliny. Na koniec, krystalizacja i liofilizacja są stosowane aby usunąć resztki soli i buforów, przygotowując stabilną formułę. Dodaje się określone addytywy (takie jak cynk i protamina) aby zaspokoić różne potrzeby kliniczne.

Wnioski:

Przetwarzanie w dalszym ciągu insuliny z E. coli jest złożone. Przyszłe działania powinny skupiać się na optymalizacji tych etapów dla efektywnej, ekonomicznej produkcji, aby zaspokoić popyt i obniżyć koszty.

Yaohai Bio-Pharma aktywnie poszukuje globalnych partnerów instytucjonalnych lub indywidualnych i oferuje najbardziej konkurencyjne wynagrodzenie w branży. Jeśli masz jakiekolwiek pytania, prosimy o kontakt: [email protected]