Dziś Yaohai jest tak podekscytowane, że chce podzielić się protokołem in vitro transkrypcji dla długich RNA. Jest to skuteczna strategia, którą naukowcy często stosują do produkcji RNA w laboratorium. W ten sposób badacze mogą wyprodukować znacznie większą liczbę długich RNA — czegoś, co jest kluczowe w badaniach różnych dziedzin biologicznych. Tutaj oferujemy krok po kroku przewodnik przygotowywania długich RNA za pomocą transkrypcji in vitro. Poruszymy również temat tego, jak możemy ulepszyć ten proces i spróbujemy rozwiązać niektóre z problemów, z którymi napotykasz podczas syntezowania długiego RNA.
Wymagane są kilka podstawowych składników do transkrypcji in vitro, zwłaszcza dla długiego RNA. Musisz dostarczyć enzym zwany polimerazą RNA, materiał piśmieniczy w postaci tryfosfatów nukleotydów (NTP), bufor wspomagający reakcję oraz pewne szablony DNA. Jak to zrobić krok po kroku, możesz znaleźć szczegółowy przewodnik tutaj:
Kilka czynników jest bardzo ważne dla poprawnego działania syntezy RNA. Najbardziej znaczącym czynnikiem jest ilość jonów magnezu w samym buforze. Polimeraza RNA wymaga dużych ilości magnezu, aby wspierać właściwe oddziaływanie z szablonem DNA i kolejne składanie się RNA. Drugim ważnym aspektem do rozważenia jest stężenie szablonu DNA. Specyficznie, musisz mieć wystarczającą ilość szablonowego DNA w reakcji, aby uzyskać dobre wydajności RNA.
Długie RNA, oczywiście, przyniesie ze sobą własny zestaw problemów. Te problemy mogą dotyczyć rozkładu RNA, wpływać na sposób, w jaki RNA się zwichrowuje, oraz tworzyć struktury, które potencjalnie mogą zakłócać syntezę RNA. Jednym ze sposobów rozwiązania tych wyzwań jest modyfikacja buforu, który używasz. W celu uzyskania bardziej kompleksowej struktury RNA, badacze mogą dodać różne specjalne chemikalia, takie jak DTT i p-merkaptetanol, aby pomóc RNA w poprawnym zwichrowaniu się i zapobiec mu przylepianiu się do siebie lub skupowaniu.
Ponadto, nie wszystkie długie rodzaje RNA są takie same i niektóre mogą wymagać alternatywnych metod syntezy. Istnieją specjalne cechy, które badacze mogą chcieć dodać do RNA, na przykład dodanie kapu 5 lub ogona Poly-A. Jeśli to jest potrzebne (jak wyjaśniono później), badacze powinni uwzględnić inne enzymy, takie jak Gwanylotransferaza i Polimeraza Poly(A). Trzeba również wybrać odpowiedni enzym polimerazy RNA, który naturalnie umożliwia im wyprodukowanie większej ilości RNA. W miarę, gdy RNA długie musi zostać zsyntetyzowane, będziemy musieli ustalić najlepsze warunki.
Długie RNA in vitro transcript Istnieje wiele kluczowych zastosowań protokołu długiego RNA in vitro transcript w różnych dziedzinach badań, testów i terapii. Pomaga naukowcom zrozumieć strukturę RNA, sposób jej działania oraz sposoby modyfikacji genów za pomocą nowoczesnych technologii. Kolejne odkrycia dotyczące różnych chorób i ich terapii, takich jak aktualne terapie oparte na RNA, pokazują, jak przydatna może być ta technologia dla medycyny.
Istnieje wiele zalet wykorzystania tego protokołu. Metoda oparta na elektroforezie jest zazwyczaj najefektywniejszym i najbardziej kosztowym sposobem produkowania dużych ilości długich RNA. Oprócz jakości RNA, dobry wynik jest również ważnym czynnikiem dla badaczy, który może im pomóc w ich badaniach, zwłaszcza jeśli potrzebują dużych ilości RNA do eksperymentów z powodu wysokiej ilości materiału wejściowego. Ponadto, transkrypcja in vitro długiego RNA jest zazwyczaj dokładniejsza i bardziej powtarzalna niż synteza chemiczna lub komórkowa RNA.
Yaohai BioPharma to jedna z 10 największych firm CDMO w dziedzinie mikrobiologicznej, która wykorzystuje protokół in vitro na potrzeby transkrypcji długiego RNA oraz sprawy regulacyjne. Dysponujemy systemem zarządzania jakością zgodnym z obecnymi standardami GMP oraz międzynarodow globalnymi regulacjami. Nasz zespół ekspertów ds. regulacji jest biegły w globalnych ramach prawnych, aby przyspieszyć wprowadzanie biopreparatów na rynek. Zapewniamy śledzoność procesów produkcyjnych, jakość produktów oraz zgodność z przepisami US FDA i EU EMA. Australia TGA i Chiny NMPA są również zadowolone. Yaohai BioPharma pomyślnie przeszła inspekcję in situ przez Kwalifikowaną Osobę (QP) Unii Europejskiej dla naszego systemu jakości GMP oraz zakładu produkcyjnego. Ponadto, przeszliśmy pierwsze certyfikacje audytów ISO9001 System Zarządzania Jakością, ISO14001 System Zarządzania Środowiskiem oraz ISO45001 System Zarządzania Bezpieczeństwem i Higieną Pracy.
Yaohai Bio-Pharma, jedna z dziesięciu największych firm produkujących biopreparaty, specjalizuje się w fermentacji mikrobiologicznej. Utworzylismy zaawansowaną infrastrukturę wyposażoną w nowoczesne urządzenia i silne możliwości produkcyjne w zakresie B+D. Dysponujemy pięcioma liniami produkcji substancji czynnych, które spełniają wymagania GMP w zakresie fermentacji mikrobiologicznej i oczyszczania, oraz dwiema automatycznymi liniami wypełniania kartridżów, fiol i szringe prewypełnionych. Dostępne skale fermentacji wahają się od 100L do 500L, 1000L i 2000L. Protokół transkrypcji in vitro dla długich RNA wynosi od 1ml do 25ml, podczas gdy specyfikacje wypełniania szringe prewypełnionych i kartridżów obejmują objętości od 1 do 3ml. Nasze warsztaty produkcyjne są zgodne z cGMP i gwarantują stabilne dostawy próbek klinicznych oraz produktów komercyjnych. Nasza fabryka produkująca duże molekuły dystrybuje je na całym świecie.
Yaohai Bio-Pharma ma doświadczenie w produkcji biologicznych leków tworzonych z mikroorganizmów. Ofieramy niestandardowe rozwiązania B+D oraz usługi produkcyjne, minimalizując potencjalne ryzyka. Pracowaliśmy z różnorodnymi technikami, takimi jak rekombinowane podjednostki komórkowe, szczepionki (w tym peptydy), czynniki wzrostu, hormony oraz Protokół Transkrypcji in vitro dla długiego RNA. Specjalizujemy się w wielu mikroorganizmach, takich jak sekrecja zewnętrzna i wewnętrzna drożdży (wydajność do 15g/L) oraz bakteryjna rozpuszczalność wewnętrzna i ciała inkluzyjne (wydajność do 10g/L). Opracowaliśmy również platformę fermentacji BSL-2 do produkcji szczepionek bakteryjnych. Mamy za sobą historię poprawiania procesów produkcyjnych, co zwiększa wydajność i obniża koszty. Dysponujemy wysoce efektywnym zespołem technologicznym, który zapewnia terminowe i wysokiej jakości realizację projektów. To pozwala nam przyspieszyć wprowadzanie na rynek waszych unikalnych produktów.
Yaohai Bio-Pharma jest liderem w dziedzinie protokołu in vitro na potrzeby CDMO długich RNA. Naszym głównym obszarem działania są produkcje szczepionek mikrobiologicznych i leczenia chorób u zwierząt domowych, człowieka oraz w medycynie weterynaryjnej. Posiadamy nowoczesne platformy technologiczne RD i produkcji, które obejmują cały proces produkcyjny – od inżynierii szczepów mikrobiologicznych, przez przechowywanie komórek i projektowanie metod aż do produkcyj klinicznych i komercyjnych, co gwarantuje nam sukces w dostarczaniu najbardziej zaawansowanych rozwiązań. Nabraliśmy ogromnej wiedzy w zakresie przetwarzania bioprocesowego mikroorganizmów. Pomyślnie zrealizowano ponad 200 projektów i wspomagamy naszych klientów w przestrzeganiu przepisów takich jak te Amerykańskiej FDA czy Europejskiej EMA. Pomagamy im również radzić sobie z wymaganiami Australijskiego TGA i Chińskiego NMPA. Dzięki naszemu doświadczeniu i ekspertyzie możemy szybko reagować na potrzeby rynku i oferować usługi CDMO dopasowane do indywidualnych potrzeb.