Rekombinant Proteinpåfylling: Deltplanlagte E. coli-strenger

Escherichia coli (E. coli) har spilt en betydelig rolle i produksjonen av rekombinante proteiner i bioteknologisk industri, og har tjenet som den første uttrykksvektoren for fremstilling av biologisk medisin. E. coli har rask vekst, enkle genetiske manipulasjoner og hurtig syntese av rekombinante proteiner blant andre fordeler. Omfattende modifikasjoner har gjort E. coli til en optimal valg for proteinet uttrykk, noe som har ført til utformingen av ulike ingeniørstrøyper av E. coli.

Yaohai Bio-Pharma spesialiserer seg på å levere én-stopp outsourcing-tjenester for fermenasjon, rensete, formuleringsprosessutvikling og produksjon av en rekke bioteknologiske produkter ved bruk av E. coli-uttrykkssystemer. Med hensyn til Yaohais omfattende erfaring, har vi sammendraget at fire vanlige E. coli-strøyper brukes til produksjon av rekombinante proteiner og deres egenskaper.

BL 21-strøype

Avledet fra E. coli B-stamme, mangel BL21-stammen Lon protease og ytre membranprotease OmpT. Lon-proteasen degraderer hovedsakelig ekogene proteiner, mens OmpT for det meste degraderer ekstracellulære matriseproteiner. Fraværet av disse to viktige proteasene kan effektivt forhindre degradasjonen av rekombinante proteiner.

Origami-stammen

Origami-stammen, en avledning av E. coli K-12, har mutasjoner i thioredoxinreduktase og glutatyonreduktase, som bidrar til å forme riktig foldede proteiner med disulfidbindinger og forbedrer proteinsolubilitet. Origami-stammen, inkludert Origami, Origami 2 og Origami B, er egnet for uttrykk av aktive proteiner med disulfidbindinger.

SHuffle-stammen

SHuffle-slagent uttrykker konstitutivt disulfidbindingsisomeraset DsbC i selleplasma, noe som fremmer opprettelsen av riktige disulfidbindinger i oksiderte proteiner. Det fungerer også som en molekylær chaperon for proteinfolding, og bistår i å danne den riktige konformasjonen.

Rosetta-slagent

Rosetta-slagent tilføyer E. coli tRNAs som svarer til sjeldne kodoner, med målsettingen å forbedre uttrykkelsesnivået av ekogene gener, spesielt eukaryotiske gener, i prokaryotiske systemer. Den er avledet fra BL21 og bærer chloramfenikolresistent pRARE-plasmiddet, som tilfører seks tRNAs som svarer til sjeldne kodoner (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC og GGA) som ursprunglig ikke finnes i E. coli, og gir dermed et mer "universelt" proteinettersett.

Konklusjon

De tre hovedfaktorene for vellykket produksjon av rekombinante proteiner er verten, vektor og kulturbetingelser. Basert på en forståelse av de fysikkokjemiske egenskapene til det rekombinante proteinet, de unike fordelsene ved hver strekk og de spesifikke behovene i eksperimentet, bør den mest egnet vert velges. I tillegg bør faktorer som plasmidvektorer, temperatur og indukere optimieres for å forbedre proteinekspresjonen.

Yaohai Bio-Pharma søker også aktivt globale partnere, både institusjonelle og enkeltpersoner, og tilbyr den mest konkurransedyktige kompensasjonen i bransjen. Hvis du har noen spørsmål, hesitate ikke å kontakte oss: [email protected]