E. coli lēkmju integritātes optimizācija biofarmaceitiķu ražošanai

Biofarmaceikļu nozarē Escherichia coli (E. coli) spēlē svarīgu lomu kā ģenerators rekombinantu oliecību izpausmēšanai. E. coli šūnu integritāte ir galvenokārt svarīga oliecību ražojuma apjoma, kvalitātes un izmaksu ziņā. Šī integritāte galvenokārt ietver iekšējās (IM) un ārējās membrānas (OM) struktūru un funkciju.

Yaohai Bio-Pharma jau 15 gadus nodarbojas ar E. coli fermentāciju un rekombinantu oliecību izpausmēšanu. Mēs lietojam dažādas stratēģijas, lai uzturētu augstu E. coli šūnu integritāti, un plazmīdu ražošanas apjoms pārsniedz 1 g/L 30 stundu audzēšanas ciklā. Atbalstoties uz plašo pieredzi mikrobiālās izpausmes jomā, Yaohai Bio-Pharma ir apkopojusi vairākas efektīvas stratēģijas, lai monitorētu un uzlabotu E. coli šūnu integritāti biofarmaceikļu ražošanas laikā.

Tehnikas E. coli šūnu integritātes monitorēšanai

Cilvēka citometrija: Izmanto fluorescences krāsojumus, lai atšķirtu šūnu stāvokļus, piemēram, propidijas jodīdu šūnu dzīvības noteikšanai un SYTO9 OM permeabilitātes novērtēšanai. Tomēr tas prasa augstas krāsojumu izmaksas un sarežģītas operācijas.

Krāsometriskie metodi: Atspoguļo šūnu lizēšanu, noteikot DNS saturu, ēnzu aktivitāti utt. uzmukšņa daļā, piemēram, izmantojot PicoGreen reagentu komplektu un alkalīnās fosfatasas aktivitātes ass. Šie metodi ir tomēr grūti un prasa dārgus reagentus.

Augstas veiktspējas skaidru kromatogrāfija: Tiek izmantota offline extracelulāro produktu koncentrāciju noteikšanai OM izplūsmas novērtēšanai. Tomēr tās automātizācija ir sarežģīta un analīzes ilgums ir garš.

Vibrācijas spektroskopijas metodi: Piemēram, tuvu infračerveni un vidēji infračerveni spektroskopija, kas ir potenciāli pielietojami, bet prasa pārvarēt spektra interferenci un datu analīzes izaicinājumus.

Dielektriskā spektroskopija: Novērtē membrānas integritāti, mērot impedanci šūnu suspendējumam, kas ļauj reālajā laikā novērot procesu tiešsaistē. Tomēr tā ir jutīga pret uztraukumiem un kalibrēšana ir grūta.

Biosensory: Var noteikt vielas, kas izdalās no šūnu iekšpuses vai periplazmas, bet saskaras ar problēmām, piemēram, sensora atjaunošanas grūtībām.

Viskozitātes un blīvuma mērīšana: Zema maksātspēja un ātra analīze, tomēr trūkst selektivitātes un prasa ņemt vērā dažādu partijas dati, lai veiktu novērtējumu.

Faktori, kas ietekmē šūnu integritāti

Šķirņa inženierija: Maina ārējās membrānas (OM) integritāti, izmantojot genetisko inženieriju, piemēram, mainot lipoproteīna genes, taču tas var ietekmēt šķirņa augšanu.

Iespiedu inducēšana: Recombinantu olīgoģeniem pārmērīga izpausme rada metabolisko slogu, kas ietekmē šūnu fiziologiju. Tāpēc nepieciešams attiecīgi regulēt izpausmes līmeni.

Substrāta piegādes tempers: Abi parāk augsts un zems piegādes tempi ietekmē šūnu sadalīšanos un ārējās membrānas integritāti.

Temperatūra un aerācija: augstas temperatūras un zema ūdeņskausības pieejamība palielina izteiksmes stresu un OM šķēlsanas, atbilstoši, taču konkrētie efekti atšķiras.

Ozmotika: Tie tiek izmantoti, lai atbrīvotu periplazmas olas, bet tie samazina šūnu dzīvību, ierobežojot to pielietojumu.

Secinājums. Nākotnes pētījumi jāsaglabā vēl dziļāk meklējot mehānismus un apstākļus, kas saistīti ar membrānu remontu, lai precīzi kontrolētu šūnu membrānas veselību. Optimalizējot monitorings metodes un analizējot ietekmes faktorus, ir gaidāms, ka tiks uzlabota produkta kvalitāte, tādējādi veicinot biomedicīnas nozares attīstību.

Mēs aktīvi meklējam institucionālos vai individuālos starptautiskos partnerus. Mēs piedāvājam nozīmē viskonkurētspējīgāko apmaksu. Ja jums ir jebkādas jautājumi, lūdzu, neuztraucieties mūs sazināties [email protected]