Šodien Yaohai ir tik sajūsmīgi kopsavamdot savu in vitro transkripcijas protokolu garām RNA. Tas ir efektīvs stratēģijas veids, ko zinātnieki bieži izmanto, lai laboratorijā ražotu RNA. Ar šo metodi pētnieki var ražināt nozīmīgi lielu garās RNA daudzumu — kas ir galvenais elements dažādu bioloģisko jomu pētījumos. Šeit mēs piedāvājam soli par solim vadlīnes gara RNA sagatavošanai in vitro transkripcijas ceļā. Mēs arī runāsim par to, kā var uzlabot procesu, un cenšamies atrisināt dažus no jūsu sastopamajiem problēmu aspektiem garās RNA sintēzes laikā.
In vitro transkripcijai, īpaši garām RNA, nepieciešami vairāki pamatkomponenti. Jums būs jānodrošina enzīms, kas saucams par RNA polimerāzi, rakstmaterials kā nukleotīdu trifosfāti (NTP), reakcijas palīdzības līdzeklis un kāds DNA templates. Kā to darīt soļu par soļu, detalizētu vadlīni var atrast šeit:
Vairāki faktori ir ļoti svarīgi, lai RNA sintēze strādātu pareizi. Izmērām tiešām nozīmīgs ir magnija joniu daudzums pašā buferā. RNA polimerāze prasa lielu magnija daudzumu, lai nodrošinātu pareizu savienojumu ar DNA veidojumu un sekosējošo RNA savilcību. Otrs svarīgais aspekts, par kuru vajadzē būt uzmanīgam, ir DNA veidojuma koncentrācija. Konkrēti, jums jābūt pietiekamiem veidojuma DNA reakcijas apjomiem, lai iegūtu labus RNA apjomas.
Garais RNA, protams, nāks ar saviem problēmu komplekšiem. Šīs problēmas var būt saistītas ar RNA sadalīšanos, ietekmēt to, kā RNA savijas, un veidot struktūras, kas iespējams traucē RNA sintēzei. Viens no veidiem, kā risināt šos izaicinājumus, ir mainīt buferu, ko izmanto. Lai iegūtu pilnīgāku RNA struktūru, pētnieki var pievienot dažādas speciālas vielas, piemēram, DTT un p-merkaptoetanolu, lai palīdzētu RNA pareizi savijties un novērstu tās piesprostēšanos vai klumpēšanos.
Turklāt, ne visi garie RNA veidi ir vienādi un dažiem var būt nepieciešamas alternatīvas sintēzes metodes. Ir specifiskas īpašības, ko pētniekiem varētu vajadzēt pievienot RNA, piemēram, 5 galvenes vai Poly-A repes pievienošana. Ja tas ir nepieciešams (kā aprakstīts vēlāk), tad pētniekiem jāiekļauj citi enzimi, piemēram, Guanylsintēzes enzims un Poly(A) polimērāze. Vajag arī izvēlēties piemērotu RNA polimerāzu enzimu, kas dabiski ļauj ražīt vairāk RNA. Kad gara RNA jāsintetizē, mums jānosaka labākais stāvoklis.
Ilgu RNA in vitro transkripts Ir daudz svarīgu lietojumu ilgu RNA in vitro transkripta protokolam dažādos pētījumos, testos un terapeitiskajos darbības veidos. Tas palīdz zinātniekiem saprast RNA struktūru, kā tā darbojas un kā to var modificēt ar modernajiem tehnoloģijas līdzekļiem. Ik dienu atklājumi par dažādām slimībām un to terapijām, piemēram, ļoti aktuālajām RNA terapijām, liecina par noderīgumu šai lasīšanas tehnoloģijai medicīnā.
Ir daudz priekšrocību, izmantojot šo protokolu. Elektroforezes bāzēta metode parasti ir efektivākā un izmaksu ziņā labākā veids, kā ražot lielas ilgas RNA daudzumus. Kā arī no RNA kvalitātes, labs ražojums ir arī svarīgs faktors pētniekiem, lai palīdzētu viņiem ar savu pētījumu, īpaši, ja viņiem ir nepieciešams liels RNA daudzums eksperimentiem dēļ augstas ievades materiāla sākumā. Turklāt, in vitro transkripcija garai RNA parasti ir precīzāka un atkārtotās rezultātu ziņā drošāka nekā RNA quimiskā sinteze vai RNA šūnu sinteze.
Yaohai BioPharma ir viena no 10 galvenajām mikrobioloģiskajām CDMO, kas iekļauj In vitro Transkripta protokolu Ilgām RNA, kā arī regulatīvajiem lietiem. Mums ir kvalitātes pārvaldības sistēma, kas atbilst pašreizējiem GMP standartiem un globāliem noteikumiem. Mūsu regulatīvo lietu eksperti ir prasmīgi globālos regulatīvo rāmis stāvokļos, lai paātrinātu bioloģisko startu. Mēs nodrošinām uzraudzītus ražošanas procesus, kvalitatīvus produktus un atbilstību ASV FDA un Eiropas ESMA noteikumiem. Austrālijas TGA un Ķīnas NMPA ir arī apmierināti. Yaohai BioPharma veiksmīgi ir pārbaudījuši vietējo Eiropas Savienības Kvalificētais Personas (QP) novērtējumu mūsu GMP kvalitātes sistēmai un ražošanas iekāpei. Turklāt mēs esam pabeiguši pirmos sertifikācijas novērtējumus ISO9001 Kvalitātes Pārvaldības Sistēmai, ISO14001 Vides Pārvaldības Sistēmai un ISO45001 Darba Veselības un Drošības Pārvaldības Sistēmai.
Yaohai Bio-Pharma, viena no desmit lielākajiem bioloģisko produktu ražotājiem, ir speciālists mikrobioloģiskās fermentācijas jomā. Mēs esam izveidojuši modernu un ērti aprīkoto uzņēmumu ar stipru izstrādes un ražošanas potenciālu. Mums ir piecas vielu ražošanas līnijas, kas atbilst GMP prasībām mikrobioloģiskajai fermentācijai un tīrīšanai, kā arī divas automatizētās aizpildīšanas līnijas kartridžiem, burkiem un iepriekš aizpildītiem siringiem. Fermentācijas mēroga iespējas dažādas no 100L līdz 500L, 1000L un 2000L. In vitro transkripcijas protokols garām RNA vai viss ir no 1ml līdz 25ml, savukārt iepriekš aizpildīto siringu un kartridžu aizpildīšanas specifikācijas ietver no 1-3ml. Mūsu ražošanas darbnīca ir cGMP saskaņota un nodrošina stabila kliniskās probešanas un komercproduktu piegādi. Mūsu uzņēmums ražo lielos molekulāros produkcijas apjomus, kas tiek eksportēti visā pasaulē.
Yaohai Bio-Pharma ir pieredze bioloģisko vielu ražošanā, kas izveidotas no mikroorganismiem. Mēs piedāvājam pielāgotus RD risinājumus un ražošanas pakalpojumus, minimizējot iespējamos riskus. Mēs esam strādājuši ar dažādiem metodiem, piemēram, rekombinantajiem šūnu apakšdaļām, vakcinām (ieskaitot peptīdus), izaugsmes faktoriem, hormoniem un In vitro Transkripta Protokolu garākiem RNA. Mēs esam specialisti daudzās mikroorganismu jomās, piemēram, ražaudzes un iekšējās sekretēšanas ražošanā sēnes (līdz 15g/L) un baktēriju iekšējās dabisks olbāžu un inklūzijas ķermeni (līdz 10g/L). Mēs arī somos BSL-2 fermentācijas platformu baktēriju vakcinu radīšanai. Mums ir pieredze ražošanas procesu uzlabošanā, palielinot ražojuma apjomu un samazinot izmaksas. Mums ir ļoti efektīva tehnoloģiju komanda, lai nodrošinātu projektu ātru un augstas kvalitātes veikšanu. Tas mums ļauj jūsu unikālos produktus piespiest tirgū.
Yaohai Bio-Pharma ir viena no vadošajām uzņēmumiem in vitro transkripta protokola garā RNA CDMO jomā. Mūsu galvenais fokus ir bijis mikrobiālo vakcinu un terapiju ražošanā, lai ārstētu mazdzelas, cilvēku un veterinārās veselības problēmas. Mums ir pieejamas modernas RD un ražošanas tehnoloģiju platformas, kas ietver veselo ražošanas procesu, sākot ar mikrobiālo šķirņu inženierzinātņu līdz šūnu banku apstrādei un metožu izstrādei, beidzot ar kliniskajiem un komerciālajiem ražošanas posmiem, nodrošinot, ka mēs varam garantēt vismodernāko risinājumu veiksmīgu piegādi. Mēs esam akumulējuši lielu zināšanu daudzumu bioapstrādes mikrobiālajā jomā. Vairāk nekā 200 projektu ir veiksmīgi pabeigti, un mēs palīdzam savām klientuēm ievērot noteikumus, piemēram, ASV FDA un Eiropas Savienības EMA. Mēs arī palīdzam tiem orientēties Austrālijas TGA un Kinijas NMPA jomā. Dēļ mūsu pieredzes un ekspertīzes mēs spējam ātri reaģēt uz tirgus prasībām un piedāvāt pielāgotas CDMO pakalpojumus.