השתפרת שלמות התאים של E. coli לייצור ביופרמאציאלי

בתחום הביופרמצבים, Escherichia coli (E. coli) משחקת תפקיד חיוני כמארח לביטוי של חלבונים רקורסנטיים. שלמות התא של E. coli היא קריטית לייצור חלבונים, איכותם ועלות הייצור. השלמות התאית מתבטאת בעיקר בהרכב ובפונקציונליות של המàng הפנימי (IM) והmàng החיצוני (OM).

ל-Yaohai Bio-Pharma יש 15 שנים של נסיון בפרמצה ובביטוי של חלבונים רקורסנטיים באמצעות E. coli. אנו משתמשים בשיטות שונות כדי להבטיח את השלמות התאית הגבוהה של E. coli, והייצור של פלזמיד עולה על 1 גרם/ליטר תוך מחזור גידול של 30 שעות. בהתבסס על ניסיון הרחב בביטוי מיקרוביולוגי, Yaohai Bio-Pharma סיכמה מספר שיטות יעילות למעקב ושיפור השלמות התאית של E. coli במהלך ייצור הביופרמצבים.

טכנכניקות למעקב אחרי השלמות התאית של E. coli

סיווג זרמים: משתמש בצבועים פלורסנטיים כדי להבדיל בין מצבים תאיים, כמו יודיד פרופIDIום לאיתור קיימא תאית ו-SYTO9 לביקורת חדירה שלOMEM. עם זאת, זה דורש עלות גבוהה של צבעים ופעולות מורכבות.

שיטות צבעוניות: מראות את התפרקות התאים על ידי איתור תוכן DNA, פעילות אנזימים וכו' במשחה, כמו שימוש בקיט של חומר PicoGreen ובמבחני פעילות של פוספטאז אלקלינית. השיטות הללו, עם זאת, הן מסובכות ודורשות חומרים יקרים.

כרומטוגרפיה נוזלית ביצוע גבוהה: משמשת לאיתור מחוץ לנתיב של ריכוזי מוצרים חיצוניים כדי להעריך דליפתOMEM. עם זאת, אוטומציה שלה היא מורכבת והזמן ניתוח ארוך.

טכנiques ספקטרוסקופיים: כמו ספקטרוסקופיה באינפרא-אדום קרוב ובינוני, שיש להם יישומים פוטנציאליים אך דורשים להתגבר על섭וקי הפרעה ואתגרי ניתוח נתונים.

ספקטרוסקופיה דייאלקטרית: מעריכה את שלמות הממברנה על ידי מדידת האימפדנס של תזזים תאיים, מה שמאפשר מעקב בזמן אמת ובקו. עם זאת, היא חשופה להפרעה וכיוונתה קשה.

ביוסנסורים: יכולים לגלות תרכובות שנפלטו מהתאים או מהפריפלסמ, אך נתקלים בבעיות כמו קשיי חידוש הסנסור.

מדידת דביקות וצפיפות: זולים בהון ובוחנים במהירות, אך חסרים בחירה והדרושים בחשבון נתונים מרובים לביצוע השיפוט.

גורמים המשפ(Collectors) השפעה על שלמות התא

הנדסה גנטית: משנה את שלמותOMEM על ידי הנדסת גנטית, כמו הדגמה של גני ליפופרוטאין, אך עשוי להשפיע על צמיחת הגזע.

טירוף מטבולי: היפרג׳קסיה של חלבונים רקורסיביים גורמת לעול מטבולי, השפיעה על פיזיולוגיה תאית. לכן, יש צורך בשיפוט סביר של רמות הביטוי.

קצב אספקת החומר העקר: גם קצב אספקה גבוה מדי וגם נמוך מדי משפיעים על קריסת התאים ושלמות OM.

טמפרטורה ואירציה: טמפרטורות גבוהות ותוקף נמוך של חמצן מגדילים את התסכול הביטוי והפרשת OM, בהתאמה, אך ההשפעות הספציפיות משתנות.

אוסמוטיקה: בשימוש לשחרור חלבונים פריפלסמיים אך מזיקים ליכולת הקיום של התא, מה ש מגביל את יישומם.

מסקנה מחקרים עתידיים צריכים להעמיק בהבנת המנגנונים והתנאים של תקון קרום כדי לשלוט באופן מדויק בחדירות קרום התא. אופטימיזציה של שיטות מעקב וניתוח גורמי השפעה צפויים לשפר את איכות המוצר, מה שיוביל לפיתוח תעשיית הביופרמצבטיות.

אנחנו גם מחפשים באופן פעיל שותפים גלובליים, سواء מוסדיים או אישיים. אנו מציעים את התשלום הקומפקטיבי ביותר בתעשייה. אם יש לכם שאלות כלשהן, אנא לא猶סorio להתקשר אלינו ב [email protected]