بازکردن رازهای استخراج پلاسمید با کیفیت بالا

استخراج پلاسمید برای محققان بسیار حیاتی است. به عنوان وکتورهای ژنی، پلاسمیدها در تحقیقات واکسن و درمان ژنتیکی که کیفیت اهمیت دارد، نقش کلیدی ایفا می‌کنند. عوامل کلیدی کیفیت شامل نسبت پلاسمید فراپیچیده و محتوای اندوتокسین است. مقررات مختلف هستند: FDA ≥80٪، SMPA ≥85٪، NMPA ≥90٪، با کمتر از 5٪ DNA خطی/داایری باز. مشتریان غالباً به نسبت فراپیچیده ≥95٪ علاقه مند هستند. سطح اندوتوکسین شامل موارد زیر است: تحقیقاتی (>50 EU/µg)، تراسفکشن (<50 EU/µg) و بدون اندوتوکسین (<0.1 EU/µg).

DNA پلاسمید فراپیچیده

پلاسمیدهای استخراج شده از اشخیریشیا کلی شامل DNA فراپیچیده (SC)، دایره‌ای باز (OC) و خطی (L) است. نسبت بالای SC کارایی تراسفکشن و بیان را افزایش می‌دهد. به عنوان مثال، تراسفکشن DNA پلاسمیدی با نسبت SC 85.45٪، 2.5 برابر بیشتر است و بیان HGF در DNA پلاسمیدی با نسبت SC 93.28٪، 1.8 برابر بیشتر است، که برتری DNA فراپیچیده را تأیید می‌کند.

دی‌ان‌ای دایره‌ای باز: وقتی یک سیم از دی‌ان‌ای دو سیمی شکسته شود، ساختار فراپیچیده آزاد می‌شود و یک پلاسمید دایره‌ای باز به وجود می‌آید که حجم بزرگتری دارد و در طول الکتروفورز کندترین حرکت را دارد و در بالا قرار می‌گیرد.

دی‌ان‌ای خطی: وقتی هر دو سیم دی‌ان‌ای پلاسمید شکسته شوند، ساختار خطی به وجود می‌آید که حجم نسبتاً کوچکتری دارد و سریع‌تر از دی‌ان‌ای دایره‌ای باز اما کندتر از دی‌ان‌ای فراپیچیده حرکت می‌کند و در مرتبه دوم قرار دارد.

دی‌ان‌ای فراپیچیده: دو هلیس به یکدیگر گره خورده و به ساختار فراپیچیده بر اساس هلیکس دی‌ان‌ای تبدیل می‌شوند. این ساختار کوچک‌ترین حجم را دارد و در طول الکتروفورز سریع‌ترین حرکت را دارد و در پایین قرار می‌گیرد.

تحلیل کمی نسبت فراپیچیدگی

آزمایشگاه‌ها از الکتروفورز ژل آگاروز (AGE) و Gel-Pro Analyzer برای تعیین نسبت فراپیچیدگی از تصاویر الکتروفورز استفاده می‌کنند. یک تصویر 97.539 درصد دی‌ان‌ای فراپیچیده (SC) نشان می‌دهد، در حالی که تصویر دیگر 63.833 درصد دی‌ان‌ای فراپیچیده (SC) و 36.167 درصد دی‌ان‌ای دایره‌ای باز (OC) را نشان می‌دهد (دی‌ان‌ای خطی قابل مشاهده نیست).

راز اندوتокسین در پلاسمیدها

انتویکسین مولفه‌ای از لایه بیرونی دیواره سلولی باکتری‌های گرم منفی است که پس از مرگ یا شکستگی باکتری آزاد می‌شود و شامل لیپوپلی‌ساکارید A سمی است. در طی استخراج پلاسمید، انتویکسین به راه حل لیزیس وارد می‌شود، کارایی تراسفکشن را تحت تأثیر قرار می‌دهد و واکنش‌های ایمنی غیرمشخصه را فعال می‌کند که می‌تواند به نتایج نادرست در آزمایش‌ها منجر شود.

تحلیل کمی و کیفی انتویکسین

آزمایش لیموس آمبوسیت لیزات (LAL) انتویکسین را از طریق جمع‌بندی با ۲-کتو-۳-دئوکسیاکتونیک اسید (KDO) در لیپوپلی‌ساکارید (LPS) تشخیص می‌دهد. این آزمایش کیفی و نیمه‌کمی است و حضور انتویکسین را از طریق تجلط یا تغییر رنگ زمانی که با نمونه‌ها مخلوط می‌شود نشان می‌دهد.

یائوهای بیو-فارما پلاسمیدهای فوق خمیده بدون انتویکسین ارائه می‌دهد. ارسال به یائوهای کارایی تراسفکشن و بیان را افزایش می‌دهد. پلاسمیدهای تحویل‌شده حداقل ۹۵٪ نسبت SC (میانگین ۸۵٪±۱۰٪) دارند و سطح انتویکسین آن‌ها ≤۰٫۱، ≤۰٫۰۱ یا ≤۰٫۰۰۵ EU/μg است.

ما همچنین به طور فعال در دنبال شرکای جهانی موسساتی یا افراد انفرادی هستیم. ما کمترین پاداش رقابتی را در صنعت ارائه می‌دهیم. اگر سوالی دارید، لطفاً حتماً با ما تماس بگیرید: [email protected]