امروز، یاهای هیچ احساس تند و شور ندارد که پروتکل ترنسکریپسیون در محیط بیرونی برای RNA طولانی را به اشتراک بگذارد. این یک استراتژی موثر است که دانشمندان اغلب برای تولید RNA در آزمایشگاه استفاده میکنند. با این روش، محققان میتوانند تعداد زیادی از RNAهای طولانی — که چیزی ضروری برای مطالعات در حوزههای مختلف زیستی است — تولید کنند. اینجا ما یک راهنمای مرحله به مرحله برای تهیه RNAهای طولانی از طریق ترنسکریپسیون در محیط بیرونی ارائه میدهیم. همچنین در مورد نحوه بهبود فرآیند صحبت خواهیم کرد و سعی میکنیم برخی از مشکلاتی که در ترکیب RNA طولانی مواجه میشوید را بررسی کنیم.
چندین مولفه اساسی برای ترنسکریپسیون در محیط بیرونی، به ویژه RNA طولانی، لازم است. باید یک آنزیم به نام پلیمراز RNA، مواد نوشتاری به صورت نوکلئوتید تریفسفات (NTPs)، یک بافر برای کمک به واکنش، و یک الیاف DNA الگویی فراهم کنید. چگونگی انجام آن مرحله به مرحله، میتوانید یک راهنمای جزیی اینجا پیدا کنید:
چند عامل برای کارآمد بودن سنتز RNA بسیار مهم است. برجستهترین اینکه، مقدار یونهای مگنزیم در خود بافر مهم است. پلیمراز RNA نیاز به مقدار زیادی مگنزیم دارد تا تعامل مناسبی با الیاف DNA قالب و پیچیده شدن بعدی RNA را حمایت کند. جنبه دیگری که باید در نظر گرفته شود، غلظت DNA قالب است. به طور خاص، باید قابلیت واکنش DNA قالب کافی داشته باشید تا عملکرد خوبی در تولید RNA داشته باشید.
RNA بلند البته همراه با مجموعهای از مشکلات خاص خود خواهد بود. این مشکلات میتوانند به تجزیه RNA، چگونگی پیچش RNA و ساختارهایی که ممکن است در راه ترجمه RNA مешکل ایجاد کنند، مربوط شوند. یکی از راهحلهای مقابله با این چالشها، تنظیم محیط پuffer است که از آن استفاده میکنید. برای دستیابی به ساختاری جامعتر از RNA، محققان میتوانند مواد شیمیایی خاص مختلفی مانند DTT و p-mercaptoethanol اضافه کنند تا کمک کنند RNA به درستی پیچیده شود و جلوگیری از چسبیدن یا تجمع آن انجام دهند.
علاوه بر این، تمام نوعهای RNA بلند شبیه به هم نیستند و برخی از آنها ممکن است نیاز به روشهای جایگزین تولید داشته باشند. ویژگیهای خاصی که محققان باید به RNA اضافه کنند وجود دارد، مانند افزودن 5' cap یا دنباله Poly-A. اگر این نیاز باشد (همانطور که در ادامه توضیح داده شده)، محققان باید انزیمهای دیگری مثل Guanylyltransferase و Poly(A) Polymerase را شامل کنند. همچنین باید یک انزیم پلیمراز RNA مناسب انتخاب کرد که به طور طبیعی قابلیت تولید بیشتر RNA را فراهم میآورد. زمانی که RNA بلند باید سنتز شود، ما باید بهترین شرایط را تعیین کنیم.
ترانسکریپت RNA دراز در محیط غیرزنده. تعداد زیادی از کاربردهای کلیدی پروتکل ترانسکریپت RNA دراز در محیط غیرزنده در چندین زمینهٔ تحقیقاتی، آزمایش و درمان وجود دارد. این ابزار به دانشمندان کمک میکند تا ساختار RNA، نحوه عملکرد آن و روشهای تعدیل ژنها با فناوریهای مدرن را درک کنند. هر روز کشف بیماریهای مختلف و درمانهای آنها، مانند درمانهای RNA مدرن، نشان میدهد که چگونه این فناوری خواندن در داخل میتواند برای پزشکی مفید باشد.
استفاده از این پروتکل دارای بسیاری از مزایا است. روش مبتنی بر الکتروفورز معمولاً بهترین و کارآمدترین راه برای تولید مقادیر زیادی از RNA بلند است. علاوه بر کیفیت RNA، عملکرد خوب نیز یک فاکتور مهم برای محققان است که به آنها کمک میکند در تحقیقات خود پیش بروند، به ویژه اگر نیاز به مقادیر زیادی از RNA برای آزمایشات داشته باشند که به دلیل نیاز به ماده اولیه زیاد از ابتدا لازم است. همچنین، ترانسکریپسیون در محیط غیرزنده برای RNA بلند معمولاً دقیقتر و قابل تکرارتر از 합 سازی شیمیایی یا تولید RNA در سلول است.
یائوهای بایو فارما یکی از ده شرکت برتر CDMO میکروبی است که پروتکل ترانسکریپت درون زیستی را برای RNA بلند و همچنین امور نظارتی به کار میبرد. ما یک سیستم مدیریت کیفیت داریم که با استانداردهای جاری GMP و همچنین مقررات جهانی هماهنگ است. تیم متخصصان نظارتی ما در چارچوبهای نظارتی جهانی ماهر است تا راهاندازی محصولات زیستی را تسهیل کند. ما اطمینان حاصل کردهایم که فرآیندهای تولید قابل رد و بدل، محصولات با کیفیت و همچنین پیروی از قوانین FDA آمریکا و EMA اروپا باشند. TGA استرالیا و NMPA چین نیز راضی هستند. یائوهای بایو فارما با موفقیت از بازرسی محوطهای کارشناس معتبر (QP) اتحادیه اروپا برای سیستم کیفیت GMP و تسهیلات تولید خود عبور داده است. علاوه بر این، ما اولین احراز مجوزها برای سیستم مدیریت کیفیت ISO9001، سیستم مدیریت محیط زیست ISO14001 و سیستم مدیریت بهداشت و ایمنی شغلی ISO45001 را انجام دادهایم.
یاوهای بیو-فارما، یکی از ده تولیدکننده برتر محصولات زیستی، متخصص در فرآوری میکروبی است. ما امکانات پیشرفتهای را برقرار کردهایم که با تجهیزات مدرن و ظرفیتهای قوی تولید RD مجهز شدهاند. ما پنج خط تولید مواد دارویی داریم که با الزامات GMP برای فرآوری میکروبی و تصفیه همخوانی دارند، همچنین دو خط پر کردن خودکار برای کارتراژها، شیشههای دارویی و سیریهای پیشپر شده نیز داریم. مقیاسهای فرMENT به طور متفاوت از 100 لیتر تا 500 لیتر، 1000 لیتر و 2000 لیتر وجود دارد. پروتکل ترانسکریپت درون زیستی برای RNA بلند برای ویالها از 1 میلیلیتر تا 25 میلیلیتر است، در حالی که مشخصات پر کردن سیریهای پیشپر شده و کارتراژ شامل 1 تا 3 میلیلیتر میشود. کارگاه تولید ما مطابق cGMP است و تأمین ثابت نمونههای بالینی و محصولات تجاری را تضمین میکند. کارخانه ما مولکولهای بزرگ تولید میکند که به سراسر جهان ارسال میشوند.
یاوهای بیو-فارما تجربهای در تولید داروها و محصولات زیستی که از میکروارگانیسمها ساخته میشوند، دارد. ما راهحلهای RD سفارشی و همچنین خدمات تولیدی را ارائه میدهیم در حالی که خطرات پتانسیل را به حداقل میرسانیم. ما با تکنیکهای مختلفی کار کردهایم، مانند زیرمجموعههای سلولی بازسازی شده، واکسنها (شامل پپتیدها)، عوامل رشد، هورمونها و پروتکل ترانسکریپتیون در محیط آزمایشگاهی برای RNA بلند. ما در زمینه بسیاری از میکروارگانیسمها متخصص هستیم، مانند افراز سلولی و بیرونی قارچان (تا 15 گرم در لیتر) و حلپذیری داخلسلولی باکتریها و بدنه شامل (تا 10 گرم در لیتر). ما همچنین یک پلتفرم فرآوری BSL-2 را برای تولید واکسنهای باکتریایی توسعه دادهایم. ما سابقه بهبود فرآیندهای تولیدی را داریم که باعث افزایش عملکرد و کاهش هزینهها میشود. ما یک تیم فناوری کارآمد داریم که ارسال زمانبندی شده و با کیفیت بالا پروژهها را تضمین میکند. این موضوع به ما کمک میکند تا محصولات منحصر به فرد شما را سریعتر به بازار برسانیم.
یاوهای بیو-فارما در حوزه پروتکل ترانسکریپت درون زلال برای RNA بلند CDMO به شمار میآید. تمرکز اصلی ما همواره تولید واکسنهای میکروبی و درمانهای مربوط به سلامت گربهها و سگها، انسان و دام بوده است. ما دارای فناوریهای نوین توسعه و تولید هستیم که تمام فرآیند تولید را از مهندسی رشتههای میکروبی، پردازش بانک سلولی و طراحی روشها تا تولید بالینی و تجاری پوشش میدهد تا مطمئن شویم که میتوانیم پاسخگویی موفق را برای ارائه جوابهای پیشرفتهترین فناوریها تضمین کنیم. ما دانش فراوانی در حوزه پردازش بیولوژیک میکروبی جمع آوری کردهایم. بیش از 200 پروژه با موفقیت به پایان رسیده و ما کلاینتهای خود را در رعایت مقررات مانند آنهای موجود در FDA ایالات متحده و EMA اروپا کمک میکنیم. ما همچنین آنها را در مسیر گذر از TGA استرالیا و NMPA چین راهنمایی میکنیم. به علت تجربه و تخصص ما، قادریم به نیازهای بازار پاسخ سریعی دهیم و خدمات CDMO سفارشی ارائه دهیم.