Täna on Yaohai nii rõõmsalt jagama oma in vitro transkriptiooniprotokolli pika RNA jaoks. See on tõhus strateegia, mida teadlased kasutavad sageli laboris RNA tootmiseks. Sel viisil saavad uurijad toota olulise koguse pikka RNA – midagi, mis on vajalik erinevates bioloogilistes uuringutes. Siin pakume sammu-sammult juhendit pika RNA ettevalmistamiseks in vitro transkriptiooni abil. Räägime ka sellest, kuidas saaksime protsessi paremaks teha ning proovime lahendada mõningaid probleeme, millega silmitsi seisate pikka RNA sünteesimisel.
In vitro transkriptiooniks, eriti pikale RNA jaoks, on vajalikud mitu olulist komponenti. Peate pakkuma enzyymi, mille nimi on RNA polümeerasese, materjalina trifosfaatidega nukleotiidid (NTP-d), reaktsiooni abistava bufferi ja mõnda DNA malli. Kuidas seda teha sammu-sammult, leiate siit detailse juhendi:
Mõned tegurid on RNA sünteesi korral tugevalt olulised. Eriliselt on puhvris endas olevate magneesiumioonide kogus oluline. RNA polümeraas nõuab suurt magneesiumi kogust, et tagada õige DNA-malliga interaktsioon ja järgnev RNA sulandamine. Teine oluline aspekt, mida tuleb arvesse võtta, on DNA-malli koonus. Täpsemalt öeldes peate oma reaktsioonis olema piisavalt mall-DNA, et saada hea RNA tootmishulk.
Pikk RNA tuleb loomulikult kaasa oma omase probleemidega. Need probleemid võivad puudutada RNA murdumist, mõjutada selle kattumist ning struktuuride moodustumist, mis võivad potentsiaalselt takistada RNA sünteesi. Üks viis need väljakutsed lahendada on muuta kasutatavat puhvrit. RNA täielikuma struktuuri saamiseks võivad uurijad lisada erinevaid spetsiaalseid keemikaale nagu DTT ja p-merkaptotanoon, et aidata RNA korralikult kattuda ja vältida selle kokkukinnimist või klumpimist.
Lisaks ei ole kõik pika RNA tüübid samad ja mõned võivad nõuda alternatiivseid sünteesimeetodeid. On olemas erilised omadused, mida teadlased võivad RNA-sse lisada, näiteks 5' kap või Poly-A hääl. Kui seda on vaja (kuidas selgitatakse hiljem), siis tuleb teadlastel lisada muud enzyimid, nagu Guanylyltransferase ja Poly(A) Polymerase. Peab ka valima sobiva RNA polymerase enzyymi, mis loomulikult võimaldab neil toota rohkem RNA-d. Kuna pika RNA tuleb sünteesida, peame tuvastama parima tingimuse.
Pikkude RNAde in vitro transkript Koos on mitmeid olulisi kasutusi pika RNA in vitro transkripti protokollis erinevates teadus-, assürti- ja raviülesannetes. See aitab teadlasi aru saada RNA struktuurist, selle toimimisviisist ja kuidas neil on võimalik geneid muuta tänapäevaste tehnoloogiate abil. Iga päev avastatakse uusi haigusi ja nende ravimeetodeid, nagu praegused RNA-ravimid, mis näitavad, kui kasulik see lugemis-tehnoloogia meditsiinis olla võib.
Selle protokolli kasutamisel on palju eeliseid. Elektroforeesi põhine meetod on tavaliselt kõige efektiivsem ja majanduslikum viis suurte kogustega pika RNA tootmiseks. RNA kvaliteedist välja arvatud on ka hea toorainete kogus oluline tegur uurijatele, et neil oleks abivahendina nende uurimiseks, eriti kui neil on vaja suuri RNA koguseid eksperimentideks, milleks on vaja alguses palju materjali. Lisaks on pika RNA in vitro transkriptsioon tavaliselt täpsem ja taastatavam kui keemiline süntees või RNA rakusüntees.
Yaohai BioPharma on üks TOP 10 mikrobioloogilisest CDMO-st, mis kasutab In vitro Transkriptiidi Protokolli Pika RNA jaoks ning regulatiivsettejuhiseid. Meil on kvaliteedihaldussüsteem, mis vastab praegustele GMP standarditele ja globaalsele regulatsioonile. Meie regulatiivspertide tiim on oskuslik globaalsetes regulatiivsetes raamistikutes, et kiirendada bioloogiliste toodete väljastamist. Me tagame jälgitavad tootmisprotsessid, kvaliteetsete toodete ja nõuetele vastava tegevuse, sealhulgas US FDA ja EU EMA reeglitele. Austraalia TGA ja Hiina NMPA on ka rahul. Yaohai BioPharma on edukalt läbinud Euroopa Liidu Kvalifitseeritud Isiku (QP) kohta toimunud kohtuplaaniga meie GMP kvaliteedissüsteemi ja tootmisasema audit. Lisaks oleme edukalt läbinud esimesed sertifitseerimisauditid ISO9001 Kvaliteedihaldussüsteemi, ISO14001 Keskkonnahaldussüsteemi ja ISO45001 Tööturu Tervise- ja Turvahaldussüsteemi kohta.
Yaohai Bio-Pharma, üks 10 suuremast bioloogiate tootjast, on spetsialist mikrobioloogilises fermantimises. Meie käime majutatud tugeva RD tootmiskaptsiiviga ja kaasaegsete seadmetega varustatud arenevas keskuses. Meil on viis aktiivse ainete tootmisjooni, mis vastavad GMP nõuetele mikrobioloogilise fermantimise ja puhastamiseks ning kaks automaatset täitmistoimingukohta kartridžide, puhvride ja eespool täidetud süütiste jaoks. Saadaolevate fermantimisskaalade vahemikul on 100L kuni 500L, 1000L ja 2000L. In vitro pikkuse RNA transkriptiooniprotokollid viaadel on 1ml kuni 25ml, samas kui eespool täidetud süütiste ja kartridžite täitnõuded hõlmavad 1-3ml. Meie tootmine tööruum on cGMP vastavusel ja tagab stabiilse kliiniliste näidiste ja kaubanduslike toodete tarnimise. Meie tööstus toodab suuri molekuleid, mis edastatakse üle maailma.
Yaohai Bio-Pharma võtab vastu bioloogiliste ravimite tootmise, mis on loodud mikroorganismidest. Pakume kohandatud RD lahendusi ning tootmisettevõtteid, vähendades potentsiaalseid riskide. Oleme töötanud mitmete tehnikutega, nagu rekombinantsete rakkude subunitaadid, vaktsiinid (sealhulgas peptiidid), kasvufaktorid, hormoonid ja In vitro Transkriptiooniprotokoll Pikk RNA jaoks. Meie spetsialistlik valdkond hõlmab mitmesuguseid mikroorganisme nagu kümned extratseellarne ja intratseellarne sekretatsioon (toodanguni 15g/L) ning bakteeriumide intratseelline dissolubility ja inklusioonikorgendid (toodanguni 10g/L). Oleme arendanud BSL-2 fermentatsiooniplatvormi bakteeriumivaktsiinide loomiseks. Meil on kogemus tootmeprotsesside parandamises, mille tulemusel suureneb toodang ja vähenevad kulud. Meil on väga efektiivne tehnoloogiateamekomp, mis tagab projektiliste tööde ajaks ja kvaliteetse täitmise. See aitab meil tuua sinu unikaalsed tooted kiiremini turule.
Yaohai Bio-Pharma on juhtiv ettevõte pika RNA CDMO in vitro transkriptiprotokollis. Meie peamiseks fookuseks on olnud mikrobioloogiliste vaktsiinide ja raviainete tootmine, mis käsitlevad loomade, inimeste ja veterinaarset tervist. Meil on värsked RD- ja tootmistehnoloogia platvormid, mis hõlmavad terve tootmisprotsessi alates mikroobsete päikese insenerimisest kuni rakubanka töötlemiseni ja meetodi disainini ning edasi kliinilisele ja kaubanduslikule tootmisele, et tagada meie võime edastada edukalt kõige uuemaid lahendusi. Meil on kokku kogunenud suur hulk teadmisi mikrobioloogilise bioprosesseerimise valdkonnas. Üle 200 projektist on edukalt lõpule viidud ja me aitame oma klientidel järgida regulatiivseid nõudeid nagu näiteks Ameerika Ühendriikide FDA ja Euroopa Liidu EMA eeskirju. Me aitame neil ka navigeerida Austraalia TGA ja Hiina NMPA raamistikus. Meie kogemuse ja spetsialiseerumise tõttu saame kiiresti reageerida turu nõuetele ja pakuda kohandatud CDMO teenuseid.