Hoy, Yaohai está muy emocionado de compartir su protocolo de transcripción in vitro para ARN largo. Es una estrategia efectiva que los científicos a menudo utilizan para producir ARN en el laboratorio. De esta manera, los investigadores pueden producir una cantidad significativamente grande de ARN largo, algo esencial para el estudio en diferentes campos biológicos. Aquí, proporcionamos una guía paso a paso para la preparación de ARN largo mediante transcripción in vitro. También hablaremos sobre cómo podemos mejorar el proceso y tratar de resolver algunos de los problemas que enfrentas al sintetizar ARN largo.
Se requieren varios componentes esenciales para la transcripción in vitro, especialmente para ARN largo. Tendrás que proporcionar una enzima llamada polimerasa de ARN, material de escritura en forma de trifosfatos de nucleótidos (NTPs), un tampón para ayudar en la reacción, y alguna plantilla de ADN. Cómo hacerlo paso a paso, puedes encontrar una guía detallada aquí:
Varios factores son muy importantes para el buen funcionamiento de la síntesis de ARN. Más notablemente, la cantidad de iones de magnesio en el propio tampón es importante. La polimerasa de ARN requiere una cantidad considerable de Magnesio para apoyar la interacción adecuada con la plantilla de ADN y el subsequente plegado del ARN. Un segundo aspecto importante a considerar es la concentración de plantilla de ADN. Específicamente, debes tener suficiente plantilla de ADN en la reacción para obtener buenos rendimientos de ARN.
El ARN largo, por supuesto, traerá consigo su propio conjunto de problemas. Estos problemas pueden relacionarse con la descomposición del ARN, afectar cómo se dobla el ARN y formar estructuras que potencialmente interfieren con la síntesis del ARN. Una manera de abordar estos desafíos es modificando el buffer que utilizas. Para una estructura más completa del ARN, los investigadores pueden añadir diferentes químicos especiales como DTT y p-mercaptoetanol para ayudar al ARN a doblarse correctamente y evitar que se pegue o forme grumos.
Además, no todos los tipos de ARN largos son iguales y algunos pueden requerir métodos de síntesis alternativos. Hay características especiales que los investigadores podrían necesitar agregar al ARN, como añadir un sombrero de 5' o una cola de poli-A. Si esto es necesario (como se explica más adelante), entonces los investigadores deben incluir otras enzimas como la Guanyiltransferasa y la Poli(A)Polimerasa. También hay que seleccionar una enzima apropiada de polimerasa de ARN que naturalmente les permita producir más ARN. Tan pronto como el ARN largo tenga que sintetizarse, necesitaremos identificar la mejor condición.
Transcripción in vitro de RNAs largos. Existen varios usos clave para el protocolo de transcripción in vitro de RNA largo en diversas investigaciones, ensayos y esfuerzos terapéuticos. Ayuda a los científicos a comprender la estructura del ARN, su funcionamiento y cómo pueden modificar genes con tecnologías contemporáneas. Cada día se descubren más enfermedades y sus terapias, como las muy actuales terapias de ARN, lo que nos permite apreciar cuán útil puede ser esta tecnología para la medicina.
Existen muchas ventajas al usar este protocolo. Un método basado en electroforesis suele ser la manera más eficiente y rentable para producir grandes cantidades de ARN largo. Además de la calidad del ARN, un buen rendimiento también es un factor importante para los investigadores, ya que les ayuda con sus estudios, especialmente si necesitan grandes cantidades de ARN para experimentos debido a la alta cantidad de material de entrada requerida. Además, la transcripción in vitro de ARN largo suele ser típicamente más precisa y reproducible que la síntesis química o la síntesis celular de ARN.
Yaohai BioPharma es uno de los 10 principales CDMO microbianos que incorpora el Protocolo de Transcripción in vitro para ARN largo, así como asuntos regulatorios. Contamos con un sistema de gestión de calidad que está alineado con los estándares GMP actuales y las regulaciones globales. Nuestro equipo de expertos regulatorios tiene experiencia en marcos regulatorios globales para acelerar el lanzamiento de productos biológicos. Garantizamos procesos de producción rastreables, productos de calidad y cumplimiento con las normativas de la FDA de EE.UU. y la EMA de la UE. La TGA de Australia y la NMPA de China también están satisfechas. Yaohai BioPharma ha pasado con éxito la auditoría en sitio del Persona Calificado (QP) de la Unión Europea para nuestro sistema de calidad GMP y nuestras instalaciones de producción. Además, hemos superado las primeras certificaciones de los sistemas de gestión ISO9001 de Calidad, ISO14001 de Gestión Ambiental y ISO45001 de Salud y Seguridad Ocupacional.
Yaohai Bio-Pharma, uno de los 10 principales productores de productos biológicos, es especialista en la fermentación microbiana. Hemos establecido una instalación avanzada equipada con instalaciones modernas y fuertes capacidades de fabricación en I+D. Contamos con cinco líneas de fabricación de sustancias farmacéuticas que cumplen con los requisitos de GMP para fermentación y purificación microbiana, además de dos líneas de llenado automatizadas para cartuchos, frascos y jeringas precargadas. Las escalas de fermentación disponibles varían desde 100L hasta 500L, 1000L y 2000L. Los protocolos de transcripción in vitro para ARN largo vienen en viales de 1ml a 25ml, mientras que las especificaciones de llenado para jeringas precargadas y cartuchos cubren de 1-3ml. Nuestro taller de producción cumple con cGMP y garantiza un suministro constante de muestras clínicas y artículos comerciales. Nuestra planta produce moléculas grandes que se envían a todo el mundo.
Yaohai Bio-Pharma tiene experiencia en la fabricación de biológicos que se crean a partir de microorganismos. Ofrecemos soluciones a medida de I+D, así como servicios de fabricación mientras minimizamos los riesgos potenciales. Hemos trabajado con diversas técnicas, como subunidades celulares recombinantes, vacunas (incluidas péptidos), factores de crecimiento, hormonas y el Protocolo de Transcripción In vitro para ARN largo. Somos especialistas en muchos microorganismos, como la secreción extracelular e intracelular de levaduras (rendimientos hasta 15g/L) y bacterias intracelulares solubles e inclusiones (rendimientos hasta 10g/L). También hemos desarrollado una plataforma de fermentación BSL-2 para crear vacunas bacterianas. Tenemos un historial de mejorar procesos de producción, aumentando los rendimientos y reduciendo costos. Contamos con un equipo tecnológico altamente eficiente para garantizar la entrega oportuna y de alta calidad de proyectos. Esto nos ayuda a llevar sus productos únicos más rápidamente al mercado.
Yaohai Bio-Pharma es un líder en el protocolo de transcripción in vitro para CDMO de largos ARN. Nuestro principal enfoque ha sido la producción de vacunas y terapias microbianas para tratar la salud de mascotas, humanos y veterinaria. Poseemos plataformas tecnológicas avanzadas de I+D y fabricación que cubren todo el proceso de fabricación, desde la ingeniería de cepas microbianas, hasta el procesamiento de bancos celulares y el diseño de métodos, hasta la fabricación clínica y comercial, asegurando así el exitoso suministro de las soluciones más avanzadas. Hemos acumulado una gran cantidad de conocimientos en el campo del procesamiento microbiano biológico. Más de 200 proyectos se han completado con éxito y ayudamos a nuestros clientes a cumplir con regulaciones como las de la FDA de EE.UU. y la EMA de la UE. También los ayudamos a navegar por la TGA de Australia y la NMPA de China. Gracias a nuestra experiencia y expertise, podemos responder rápidamente a las necesidades del mercado y ofrecer servicios CDMO personalizados.