I dag er det så spændende for Yaohai at dele sin in vitro-transkriptionsprotokol for lange RNA'er. Det er en effektiv strategi, som forskere ofte bruger til at producere RNA i laboratoriet. På denne måde kan forskere producere et betydeligt stort antal lange RNA'er – noget, der er essentielt for studier inden for forskellige biologiske områder. Her leverer vi en trin-for-trin guide til forberedelsen af lange RNA'er via in vitro transkription. Vi vil også tale om, hvordan vi kan gøre processen bedre og forsøge at behandle nogle af de problemer, du står overfor under syntesen af lange RNA'er.
Flere nødvendige komponenter kræves for in vitro transkription, især lange RNA'er. Du skal have en enzyme kaldet RNA polymerase, skrivemateriale i form af nukleotidtrifosfat (NTP'er), en buffer til at bistå reaktionen, og nogen DNA-skabelon. Hvordan man gør det trin for trin, kan du finde en detaljeret vejledning her:
Flere faktorer er meget vigtige for den god funktion af syntesen af RNA. Mærkværdigvis er mængden af magnesiumioner i bufferen selv vigtig. RNA polymerase kræver en stor mængde magnesium for at understøtte den korrekte interaktion med DNA-skabelonen og efterfølgende folding af RNA'en. Et andet vigtigt aspekt at overveje er koncentrationen af DNA-skabelon. Specifikt skal du have nok skabelon-DNA i reaktionen for at få gode RNA-afgifter.
Lang RNA vil selvfølgelig komme med sine egne problemer. At disse problemer kan have at gøre med nedbrydningen af RNA, påvirke hvordan RNA folder sig, og opbygge strukturer, der potentielt kan forstyrre syntesen af RNA. En måde at tackle disse udfordringer er ved at justere bufferten, du bruger. For en mere omfattende struktur af RNA kan forskere tilføje forskellige specielle kemikalier såsom DTT og p-merkaptoethanol for at hjælpe RNA med at foldes korrekt og forhindre det fra at sætte sammen eller klumpes.
Desuden er ikke alle lange RNA-typer ens, og nogle kan kræve alternative syntese metoder. Der findes specielle funktioner, som forskere måske skal tilføje til RNA'en, såsom at tilføje en 5' cap eller en Poly-A hale. Hvis dette er nødvendigt (som forklaret senere), bør forskere inkludere andre enzymersom Guanylyltransferase og Poly(A) Polymerase. Man skal også vælge et passende RNA polymerase-enzyme, der naturligt gør det muligt at producere mere RNA. Så snart lang RNA skal syntetiseres, skal vi identificere de bedste vilkår.
Lange RNA'er in vitro transkript. Der findes en række vigtige anvendelser af protokollen for langt RNA in vitro transkript på tværs af flere forsknings-, tests- og terapeutiske aktiviteter. Det hjælper forskere med at forstå strukturen på RNA, hvordan det fungerer og hvordan de kan ændre gener med moderne teknologier. Dagligt opdaget man nye sygdomme og deres behandlinger, såsom de meget aktuelle RNA-terapiers, hvilket lader os tro på, hvor nyttig denne læse-teknologi kan være for medicinen.
Der er mange fordele ved at bruge dette protokol. En elektroforesbaseret metode er generelt den mest effektive og økonomiske måde at producere store mængder lang RNA på. Uden for kvaliteten af RNA er en god udbytte også en vigtig faktor for forskere, der skal hjælpe dem med deres forskning, især hvis de har brug for store mængder RNA til eksperimenter på grund af høj indgangsmateriale allerede fra starten. Desuden er in vitro-transkription af lang RNA typisk mere nøjagtig og gengivelig end kemisk syntese eller cellebaseret syntese af RNA.
Yaohai BioPharma er en af de 10 førende mikrobiologiske CDMO'er, der indfører In vitro Transcript-protokol til lang RNA samt reguleringsspørgsmål. Vi har et kvalitetsstyringssystem, der overholder de nuværende GMP-standarder og globale regler. Vores team af reguleringsexperter er dygtige i globale reguleringssammenhænge for at accelerere lanceringen af biologiske produkter. Vi sikrer sporbar produktion og kvalitetsprodukter, samtidig med at vi overholder kravene fra US FDA og EU EMA. Australia TGA og Kina NMPA er også tilfredse. Yaohai BioPharma har succesfuldt gennemført audit på plads af Den Europæiske Unions Kvalificerede Person (QP) for vores GMP-kvalitetsystem og produktionssanering. Desuden har vi bestået de første certificeringsaudits af ISO9001 Kvalitetsstyringssystem, ISO14001 Miljøstyringssystem og ISO45001 Arbejdsplads Sundhed og Sikkerhedssystem.
Yaohai Bio-Pharma, en af de 10 førende producenter af biologiske produkter, er specialist inden for mikrobiel fermentering. Vi har etableret et avanceret anlæg, der er udstyret med moderne faciliteter og stærke RD-produktionskapaciteter. Vi har fem stofproduktionslinjer, der overholder GMP-kravene til mikrobiel fermentering og renring, samt to automatiserede fyldningslinjer til kartidge, flasker og præfyldte sprøjtepiller. De tilgængelige fermenteringsstørrelser varierer fra 100L til 500L, 1000L og 2000L. In vitro Transkriptionsprotokollet for lang RNA for via er på 1ml til 25ml, mens specifikationerne for præfyldte syringe- og kartidgefyldninger dækker 1-3ml. Vores produktionsværksted er cGMP-kompatibelt og garanterer en stabil levering af kliniske prøver og handelsvarer. Vores anlæg producerer store molekyler, der leveres verden over.
Yaohai Bio-Pharma har erfaring med produktion af biologiske stoffer, der oprettes fra mikroorganismer. Vi tilbyder skræddersyede RD-løsninger samt produktionservices, samtidig med at vi mindsker potentielle risici. Vi har arbejdet med forskellige teknikker, såsom rekombinante celledelunderenheder, vacciner (herunder peptider), vækstfaktorer, hormoner og In vitro Transkriptionsprotokollen for Lang RNA. Vi er specialister inden for mange mikroorganismer som gær ekstracellulær og intracellulær sekretion (opnåelse op til 15g/L) og bakterielle intracellulære løselige og inklusionslegemer (opnåelse op til 10g/L). Vi har også udviklet en BSL-2 fermentationsplatform til fremstilling af bakterielle vacciner. Vi har et godt ry i forbedring af produktionsprocesser, hvilket øger udbyttet og reducerer omkostningerne. Vi har et højtydende teknisk team, der sikrer tidsmæssig og høj kvalitet på leveringen af projekter. Dette hjælper os med at få dine unikke produkter hurtigere på markedet.
Yaohai Bio-Pharma er en førende inden for in vitro-transkriptionsprotokol til lang RNA CDMO. Vores hovedfokus har været produktion af mikrobielle vaccinationer og terapi til behandling af dyr, mennesker og veterinær sundhed. Vi besidder fremgangsmåde inden for RD og produktionsplatforme, der dækker hele produktionssprocessen fra mikrobielle stammeindrætning, celler bankbehandling og metodeudvikling til klinisk og kommersiel produktion, hvilket sikrer, at vi kan levere de mest avancerede løsninger med succes. Vi har akkumuleret en stor mængde viden inden for mikrobiel bioprocessering. Over 200 projekter er blevet udført med succes, og vi hjælper vores kunder med at overholde regler som dem fra US FDA samt EU EMA. Vi hjælper dem også med at navigere gennem Australia TGA og China NMPA. På grund af vores erfaring og ekspertise kan vi reagere hurtigt på markedets krav og tilbyde tilpassede CDMO-tjenester.