Odhalení optimální dávky eGFP reportérské RNA

V molekulární biologii a biotechnologii se projevuje zvýšená zelená fluorescenční bílkovina (eGFP) jako klíčový reportérní gen díky své schopnosti produkovat jasně zelenou fluorescenci v délce vlny 509 nm. Tento bílek, původně izolovaný z medúzy Aequorea victoria, je přímým detekčním markérem v kulturách savčích buněk, který usnadňuje monitorování a optimalizaci účinnosti transfekce. Nicméně vzniká otázka: jaká je optimální dávka RNA reportérního genu eGFP pro dosažení požadované úrovně expresce?

Výzkum ukázal, že účinnost eGFP reporter RNA značně závisí na její dávce, zejména v kontextu kruhové RNA (circRNA) a samoozbrojující se mRNA (saRNA) systémů. Studie provedené týmem Katrien Remautové z Nanomedicínského výzkumného skupenství Univerzity v Gentu zdůraznily složitý vztah mezi dávkou saRNA a její překladovou efektivitou v retinálních buňkách. Zjistili, že nízké dávky saRNA, pod prahem aktivační imunity, umožňují efektivní výrobu bílkoviny. To potvrzuje důležitost přesné kontroly dávky pro využití plného potenciálu eGFP reporter RNA.

Ve praktických aplikacích mohou být běžně používané koncentrace mRNA eGFP v rozmezí od mikrogramů (μg) po nanogramy na mikrolitr (ng/μL). Například v experimentech s transfekcí byly dávky od 0,05 μg do 0,5 μg mRNA eGFP dokázány jako schopné vyvolat významné úrovně expresce v různých typech buněk, s procentem pozitivních buněk dosahujícím až 99-100 % v některých případech. Zvláště v dávkách pod 0,1 μg ukazuje saRNA lepší úrovně expresivity ve srovnání s lineární mRNA, což demonstruje její výhodu samoamplifikace.

Univerzálnost RNA reportéru eGFP spočívá nejen v její jasné a stabilní fluorescenci, ale také v její přizpůsobitelnosti různým experimentálním nastavením. Výzkumníci mohou dávku přizpůsobit svým konkrétním potřebám, čímž zajišťují přesnou kontrolu nad úrovněmi genecké expresce. Tato vlastnost činí eGFP neocenitelným nástrojem pro studium funkce genu, sledování osudu buněk a optimalizaci protokolů transfekce.

Shrnutím je, že optimální dávka eGFP reporter RNA značně závisí na experimentálním kontextu a požadovaných výsledcích. Pečlivým vybráním vhodné dávky mohou výzkumníci využít plný potenciál tohoto univerzálního reporterového genu, čímž rozšíříme naše porozumění molekulárním mechanismům a podpoříme inovaci v biotechnologii.

Yaohai Bio-Pharma je první a největší společnost CRDMO věnovaná mikrobiálnímu expresnímu systému pro biologické léky v oblasti Velké Číny. Snažíme se splnit klinické a komerční potřeby našich globálních zákazníků v oblasti biologických léků, vakcín a diagnostiky pro lidskou i veterinární použití.

Hledáme také aktivně globální partnery, jak institucionální, tak jednotlivce. Nabízíme nejvyšší odškodnění v odvětví. Pokud máte jakékoli otázky, neváhejte nás kontaktovat: [email protected]