Podpora metod úpravy reporter RNA

Při volbě, která metoda úpravy mRNA je přednostní, neexistuje jednoznačná odpověď, protože každá metoda a každý reportérní gen má své vlastnosti a vhodné scénáře použití. Následují některé běžné metody úpravy mRNA a reportérní geny spolu s jejich charakteristikami a vhodností.

metody úpravy mRNA

Methylace:

1. m6A : Související se stabilitou mRNA, spliceacím procesem, překladem a zpracováním miRNA. Výzvy detekce zahrnují výběr antitela a lokalizaci.
2. 5' Kap Nm : Zvyšuje stabilitu, spliceací proces, polyadenylaci a export do jádra. Pomáhá rozlišovat vlastní RNA od cizí RNA.
3. Pseudouridylování : Mění kodony, zvyšuje stabilitu a reaguje na stres. Katalyzováno pseudouridin syntázami.

Úvod nestavových nukleotidů:

1. Představeno během transkriptace pomocí strategie duální chemické modifikace. Zvyšuje stabilitu, účinnost a výraz bílkovin.

Reportérské geny

1. Gen zelené fluorescenční bílkoviny (GFP) : Výhody: Snadné k detekci, stabilní fluorescenční vlastnosti, netoxické pro buňky, vhodné pro sledování živých buněk. Nevýhody: Omezená intenzita fluorescence.
2. Zesílená zelená fluorescenční bílkovina (eGFP) : Výhody: Téměř 6krát jasnější než divoký typ GFP, čímž je vhodnější jako reportérský gen pro studium expresních procesů, regulace, diference buněk a lokace a přepravy bílkovin u organismů.
3. Červené fluorescenční bílkoviny (např. mCherry) : Výhody: Delší vlnové délky expanze a emise, což snižuje pozadí při intracelulárním sledování, vynikající fluorescenční jas a fotostabilita a nižší buněčná toxickost. Nevýhody: Možná se nepoužívají tak často jako GFP v určitých experimentálních podmínkách.
4. Luciferáza světlušky : Výhody: V přítomnosti ATP, magneziových iontů a kyslíku může katalyzovat oxidaci luciferinu na oxyluciferin, přičemž vychází bioluminescence. Je vhodné použít jako kontrolu pro studium efektivity překladu cílových genů v savčích buňkách, životaschopnosti buněk a in vivo imaginačních asesmentech.

Závěr

Při volbě, která metoda úprav mRNA s reportérem je preferovaná, záleží na konkrétních experimentálních cílech, výzkumných pozadích a experimentálních podmínkách. Například, pokud je vyžadována velká citlivost, eGFP může být lepší volbou. Pokud je třeba snímat delší vlnové délky kvůli snížení pozadí, červené fluorescenční proteiny, jako je mCherry, mohou být vhodnější. Navíc, na základě specifických potřeb úpravy mRNA (např. zvýšení stability, zlepšení efektivity překladu), lze vybrat odpovídající úpravní metodu.

Jako první a největší mikrobiální biologická CRDMO v oblasti Velké Číny nabízí Yaohai Bio-Pharma komplexní individuální řešení nebo samostatné služby od syntézy RNA, inženýrství a konstrukce šťávy, vývoje horního a dolního proudu procesu, po výrobě látky podle GMP nebo mimo GMP úroveň a službami fill & finish pro různé modality, jako jsou mRNA, circRNA, plazmidová RNA, rekombinantní bílkoviny, peptidy, enzymy, jednodoménové antikorpusy a VLP pro lidskou a veterinární použití.

Yaohai Bio-Pharma aktivně hledá globální partnery, jak institucionální, tak individuální, a nabízí nejvyšší odměny v odvětví. Pokud máte jakékoliv otázky, neváhejte nás kontaktovat: [email protected]