Dnes je pro Yaohai velmi vzrušující sdílet svůj protokol in vitro transkripcemi pro dlouhé RNA. Je to účinná strategie, kterou vědci často používají k produkci RNA v laboratoři. Tímto způsobem mohou výzkumníci vyprodukovat významně velké množství dlouhých RNA – něco, co je nezbytné pro studium v různých biologických oborech. Zde poskytujeme postupné pokyny pro přípravu dlouhých RNA pomocí in vitro transkripce. Mluvili jsme také o tom, jak můžeme proces zlepšit a snažíme se řešit některé problémy, které se vyskytují při syntéze dlouhých RNA.
Pro in vitro transkripci, zejména pro dlouhé RNA, je třeba několik klíčových složek. Musíte mít enzym nazvaný RNA polymeráza, materiál ve formě nukleotidových trifosfátů (NTP) a bufer, který pomáhá reakci, a nějakou DNA šablonu. Jak to udělat krok za krokem, najdete podrobný průvodce zde:
Několik faktorů je velmi důležitých pro úspěšné probíhání syntézy RNA. Nejvíce ze všeho je množství magneziových iontů ve vlastním buferu důležité. RNA polymeráza vyžaduje velké množství magnezia pro správné interakce s DNA šablonou a následné sčítání RNA. Dalším důležitým aspektem je koncentrace DNA šablony. Specificky, musíte mít dostatek šablonové DNA v reakci, abyste dosáhli dobrého výnosu RNA.
Dlouhé RNA samozřejmě přinese se svou vlastní sadou problémů. Tyto problémy mohou souviset s rozkladem RNA, ovlivňovat způsob, jakým se RNA skládá, a tvořit struktury, které by mohly rušit syntézu RNA. Jedním ze způsobů, jak tyto výzvy řešit, je úprava vybraného tamponu. Pro komplexnější strukturu RNA mohou výzkumníci přidat různé speciální látky, jako je DTT a p-merkaptethanol, které pomáhají RNA správně se skládat a brání jí v lepení nebo srážení.
Navíc nejsou všechny druhy dlouhých RNA stejné a některé mohou vyžadovat alternativní metody syntézy. Existují speciální vlastnosti, které výzkumníci možná budou chtít přidat do RNA, jako je například přidání 5' kapky nebo Poly-A ocasu. Pokud je to potřeba (jak je vysvětleno později), výzkumníci by měli zahrnout další enzymy, jako je Guanylyltransferasa a Poly(A) Polymerasa. Musí se také vybrat vhodný enzym RNA polymeráza, který přirozeně umožňuje produkci více RNA. Jakmile bude třeba syntetizovat dlouhou RNA, budeme muset určit nejlepší podmínky.
Dlouhé RNA in vitro transkripty Existuje několik klíčových použití protokolu dlouhého RNA in vitro transkriptu v různých výzkumných oblastech, testech a terapeutických snahách. Pomáhá vědcům porozumět struktuře RNA, způsobu jejího fungování a tomu, jak lze modifikovat geny pomocí současných technologií. Každý další den - objev nových nemocí a jejich terapií, jako jsou aktuální RNA terapie - nám ukazuje, jak užitečná může být tato čtecí technologie pro medicínu.
Použití tohoto protokolu má mnoho výhod. Metoda založená na elektroforezi je obecně nejefektivnějším a nejvíce ekonomickým způsobem, jak vyrobit velké množství dlouhé RNA. Kromě kvality RNA je také důležitým faktorem pro výzkumníky dobrý výnos, který jim může pomoci s jejich výzkumem, zejména pokud potřebují velké množství RNA pro experimenty kvůli vysokému množství vstupního materiálu. Navíc je in vitro transkripcе pro dlouhou RNA obvykle přesnější a spolehlivější než chemická syntéza nebo buněčná syntéza RNA.
Yaohai BioPharma je jedna z deseti největších mikrobiologických CDMO, která začleňuje in vitro transkripci pro dlouhé RNA a také regulační záležitosti. Máme systém řízení kvality, který odpovídá současným GMP standardům a globálním předpisům. Naše týmy odborníků na regulace jsou obeznámeny s globálními regulačními rámci, aby urychlily vstup biologických produktů na trh. Zajišťujeme sledovatelné produkční procesy, kvalitní produkty a dodržování pravidel US FDA a EU EMA. TGA Austrálie a NMPA Číny jsou rovněž spokojeny. Yaohai BioPharma úspěšně prošla inspekční kontrolou kvalifikované osoby (QP) Evropské unie pro náš systém kvality podle GMP a naši produkční zařízení. Navíc jsme úspěšně absolvovali první certifikační audit Systému řízení kvality ISO9001, Systému řízení životního prostředí ISO14001 a Systému řízení bezpečnosti a ochrany práce ISO45001.
Yaohai Bio-Pharma, jedna z deseti největších výrobců biologických produktů, se specializuje na mikrobiální fermentaci. Vytyčili jsme si pokročilé zařízení vybavené moderními prostředky a silnou RD výrobní kapacitou. Máme pět výrobních link pro látky podléhající GMP požadavkům na mikrobiální fermentaci a čištění, dále dvě automatizované linky na výplň kartridžů, skleněných tub a přednaplněných špejlových stříkaček. Kapacity fermentace se pohybují od 100L až po 500L, 1000L a 2000L. Protokol in vitro transkriptu pro dlouhé RNA pro via je od 1ml do 25ml, zatímco specifikace pro přednaplněné špejlové stříkačky a kartridže pokrývají rozsah 1-3ml. Naše výrobní dílna je cGMP kompatibilní a zajišťuje stabilní dodávku klinických vzorků i komerčních položek. Naše zařízení produkce velkých molekul je distribuováno po celém světě.
Yaohai Bio-Pharma má zkušenosti v výrobě biologických látek, které jsou vyrobeny z mikroorganismů. Nabízíme přizpůsobená RD řešení stejně jako výrobní služby s minimizací potenciálních rizik. Pracovali jsme s různými technikami, jako jsou rekombinantní buněčné podjednotky, vakcíny (včetně peptidů), růstové faktory, hormony a Protokol in vitro transkriptu pro dlouhé RNA. Jsme specialisté na mnoho mikroorganismů, jako je kvasinky extracelulární a intracelulární sekrece (výnos až 15g/L) a bakterie intracelulárně rozpustné a inkluzní těleso (výnos až 10g/L). Vyvinuli jsme také fermentační platformu BSL-2 pro vytváření bakteriálních vakcín. Máme historii úspěšného zlepšování produkčních procesů, čímž zvyšujeme výnosy a snižujeme náklady. Máme velmi efektivní technologický tým, který zajistí včasné a vysokokvalitní dodání projektů. To nám pomáhá dostat vaše unikátní produkty rychleji na trh.
Yaohai Bio-Pharma je předním poskytovatelem služeb In vitro Transcript Protocol pro Long RNA CDMO. Naše hlavní zaměření bylo výroba mikrobiálních vakcín a léčiv pro péče o zdraví domácích zvířat, lidí a veterinární oblasti. Vlastníme moderní výzkumné a výrobní technologické platformy, které pokrývají celý výrobní proces od inženýrství mikrobiálních štréd, přes úložiště buněk a návrh metod až po klinickou a komerční výrobu, abychom zajistili úspěšné dodání nejmodernějších řešení. Shromáždili jsme obrovské množství znalostí v oblasti bioprocessingu mikroorganismů. Bylo úspěšně dokončeno více než 200 projektů a pomáháme našim klientům dodržovat předpisy, jako jsou ty americké FDA či evropské EMA. Pomáháme jim také s navigací australského TGA a čínského NMPA. Díky našemu zkušenostem a odbornostem můžeme rychle reagovat na tržní požadavky a nabízet přizpůsobené CDMO služby.