Выкарыстанне сілы стратэгіі ферментацыі Fed-batch

Pichia pastoris шырока выкарыстоўваецца ў вытворэнні розных гэтэраклагальных белкаў. Тэхналогія ферментацыі з високай густинаю клетак (HCDF), якая рэалізуецца праз кормленне Fed-Batch, паспяхова дасягнула масштабнага вытвору біяфармацеўтыкаў і промысловых энзымоў. У точно ўладаемых сярэдавых выкарыстанне тэхналогіі HCDF можа атрымаць высокая выдача, высокая чыннасць і эканамічная перацэньга рекамбінатных белкаў.

Недавнія даследаванні паказваюць, што праз стратэгіі HCDF робіцца спробы павялічыць вытвор і чыннасць гэтэраклагальных белкаў у Pichia pastoris. Тэхналогія HCDF дазваляе лёгка атрымаць высоцкія класцеры клетак у вызначаных сярэдавых, што дазваляе атрымаць абільшую колькасць рекамбінатных белкаў з павышанай чыннасцю і зменшэннымі затратамі праз HCDF. Аднак, выбар правільнай стратэгіі HCDF для аптымізацыі высоцкага выразу спецыфічных белкаў у Pichia pastoris застаецца выклікам.

Ферментацыя з високай густинаю клетак (HCDF)

Pichia pastoris відлічвае ў працэсе выработкі гетералагічных белкаў, яго часта выкарыстоўваюць для HCDF у аўтаматызаваных біорэактарах. HCDF мае 3 этапы: глицерыная партия, кормленне і індукцыя метаналам. Yaohai Bio-Pharma мае больш чым дзесяць гадоў досвіду ў мікробнай ферментацыі і здзейсніла больш за 400 праектаў. Кампанія мае шырокі дасягненні і хутка розвінутую тэхналогію, што дазваляе ёй выкарыстоўваць розныя стратэгіі HCDF, каб павялічыць эфектыўнасць выработкі белка.

Метанал выступае як індуктар AOX1 і як крыху карбона, але яго канцэнтрацыя павінна быць ўладана, каб уяшчэўніць токсічнасць. Ацэнка розных стратэгіяў кормлення метаналам зыходзіць ключавай для аптымізацыі росту Pichia pastoris і экспрэсіі белка.

Стратэгія індукцыі метаналам

У стратэгіі індукцыі метаналам у фед-бэтч HCDF, станавыя індукцыйныя метады ўключаюць набор схем кантролю, якія рэгулююць дадатковы ўвод метанала праз онлайн/афлайн або прымацоеўны/зворотны кантроль. Сміжныя статыстычныя індукцыйныя метады галоўным чынам уключаюць μ-stat, Dissolved Oxygen (DO)-stat, метанал-stat, і біамаса-stat.

1.1 μ-stat

стратэгія μ-stat падтрымлівае стаялы рост біамасы шляхам кантролю μ, што дапамагае рэпрыдукцыйнасці і вывучэнню ўплыву μ на экспрезію белка. Праводзячы, яна не мае прымярнага кантролю метанала і DO, што можа прывесці да накаплівання і генеравання ROS.

1.2 DO-stat

Стратегія DO-stat непасрэдна рэгулюе падачу метанолу, кантруючы дысольваны кісларод, каб падтрымліваць аksігенаванне, але яна не фіксуе канцэнтрацыю метанолу і швидкасць росту, што можа ўплывець на вывучэнне экспрезіі белка. Аксігенаванне прэзентае вызов у аэраўнай ферментацыі, і хоць дапамога чыстага кісларода можа быць зацікавленай і токсічнай, падвышэнне ціскам — гэта больш эканамічная падыход, якая таксама можа падняць актыўнасць белка.

1.3 Methanol-stat

Недастатак кантролювання канцэнtraцый метанолу ставіць абмежаванні для стратэгій μ-stat і DO-stat. Метаналныя статыстычныя стратэгіі, якія працуюць у рэжыме ўключэння/выключэння, склонны да колебанняў і не маюць дакладнасці. У супрацьлегласці, PID-кантралеры пропануюць больш дакладнае рэгуляванне канцэнtraцый метанолу, што павялічвае загалом эфектыўнасць ферментацыі.

1.4 Biomass-stat

Стратегія biomass-stat вызначае адносіну паміж біамасай і кормленнем метаналам, аптымізуя шыкарніць метаналу для павелічэння выдачы белка. Анлайн-адзіранне біамасы ўдзельнейшее, з флоў-цытаметрыяй як улюблёным спосабам. У масяге 1000 літраў, аптымізацыя шыкарніць метаналу значна павялічвае актыўнасць энзыму, выдачу і працавыдасць, перавышаючы флаковую ферментацыю.

Ко-кормленне стратэгія

Гліцэраль, якінішнячы AOX1 прамутара, павінен быць цалкам спожараны да індукцыі метаналам, каб уяшчэ не давялачы вырабку белка. Казмічныя субстраты можуць павялічыць актыўнасць энзыму, але перамера гліцэраля можа шкодзіць росту і экспresasii. Сорбіт, аскорбіновая кіслата, манніт і іншыя могуць замяніць гліцэраля, зменшыўшы протэалізацыю і час выхавання, і павялічыўшы выработку белка.

Банк штамав патрабуе ўведзення правільных метадаў захавання і размешчэння ў дапасаваным умовах для захавання стаяснасці характарыстык штама. Yaohai Bio-Pharma можа задаволіць патрабаванні да захавання глицерыным запасам (праз ультра-низатэмпературныя халодильнікі ці жыдкі азот) і замеражвання-сушка для захавання дріжджоў і E. coli.

Страта, спрычынена абмежаваннем

У Pichia pastoris абмежаваныя ўмовы, такія як нізкі DO, канцэнтрацыя метаналу і абмежаванне кісларода, пабудоўвайшую вырабку рэкомбінатных белкаў. Умовы, абмежаваныя кіслародам, актыўнуюю промутара AOX1 праз накапліванне метаналу, што звышай выхад белка і адносна змяшчае вытворчасць халаду. Індукцыя ў нізкіх температурах павялічвае выдачу, актыўнасць, стаяснасць і жыццёспасабнасць клетак, але дадае затрат на халадзенне. Кантроль pH і абмежаванне азоту таксе дапамагаюць вырабе, неабходна буцца ўвагі, каб уяшчэўляць аперацыйныя праблемы. Абмежаванне азоту значна павялічвае спецыфічную вытворчасць белка.

Yaohai Bio-Pharma таксама акtyўна шукае глобальныя партнёраў — інстытуцыі або адзінак — і прапануе найвышчыя ва ўсьцім промысловым секторы выкуп. Калі у вас ёсць якія-небудзь пытанні, калі ласка, не лячас ці свяжыцеся з намі: [email protected]