Сёння Yaohai дзеля нас так цікава падзеліцца свайм пратаколам транскрыпцыі in vitro для даўнага RNA. Гэта ўчынны стратэгія, якую навукоўцы часта выкарыстоўваюць для вырабу RNA у лабараторыі. У гэтым спосабе даследчыкі могуць атрымаць значна больш вялікую колькасць даўнага RNA — што заснаводна для даследавання ў розных біялагічных галінах. Тут мы прынісем крок за крокам праводзік па падготовцы даўных RNA праз транскрыпцыю in vitro. Мы таксама памовім аб тым, як можна зробіць працэс лепшым і спробыем адказаць на некаторыя праблемы, з якімі вы сталкнуліся пры сінтэзі даўнага RNA.
Для транскрыпцыі in vitro, асабліва для даўнага RNA, патрабуецца некалькі асноўных кампанентоў. Вам трэба будзе прадстаўляць энзым, які называецца RNA-полімераза, матэрыялы для пісання у выглядзе нуклеатыдных трифосфат (NTP), буфер, які дапамагае реакцыі, і некаторы DNA-шаблон. Як гэта зrobіць крок за крокам, вы можаце знайсці дэтальны праводзік тут:
Некалькі чыннікаў маюць агромнае значэнне для правільнага працуючага синтэзу RNA. Найбуйней, колькасць магнезіевых іонаў у буферы сам по сабе важная. RNA-полімераза патрабуе значнага колькасці Магнезію, каб падтрымліваць правільнае ўзаімадзеянне з шаблонам DNA і наступнае складанне RNA. Другі важны аспект, які трэба ўлічыць, гэта канцэнтрацыя шаблона DNA. Конкрэтна, неабходна маты такую колькасць шаблона DNA, каб атрымаць вышуканы RNA.
Довгая RNA, звычайна, прынесе сваю серыю проблем. Ці problemy магут буць звязаны з разпадам RNA, ўплывати на тое, як RNA складаецца, і ствараць структуры, якія магут прадапаваць синтэз RNA. Адным спосабам рашэння гэтых выклікаў з'яўляецца карыстанне модифікацыяй буфера. Дла больш агульнай структуры RNA, навукоўцы могуць дадаваць розныя спецыяльныя хімічныя рэчовіны, такія як DTT і p-меркаптанал, каб дапамогчы RNA правільна складацца і прадапаліваць яе ад самазалеплення ці аб'яднання.
Крічай, не ўсі тыпы даўніх RNA аднолькавыя і некаторыя могуць патрабаваць альтэрнатыўных метадаў сінтэзу. Існуюць спецыфічныя функцыі, якія даследчыкам можа патрэбна будзе дадаць у RNA, напрыклад, даданне 5-капы ці Poly-A хвоста. Калі гэта патрэбна (як аб'яснена пазней), тады даследчыкам слід ўключыць іншыя энзымы, такія як Гуанілтрансфераза і Poly(A)Полімераза. Таксама трэба вылучыць дапасаваны энзым RNA-полімеразы, які натуральна дазволяе ім вырашыць больш RNA. Як толькі даўнае RNA патрэбна сінтэзаваць, нам трэба будзе вызначыць найлепшыя ўмовы.
Довгі РНК транскрыпт вітрына ёсць некалькі ключавых выкарыстанняў пратокола транскрыпцыі довгіх РНК in vitro ў розных навуковых, тэsts і лячэнчых паслугах. Яно дапамагае навукоўцам зразумець структуру РНК, як яна працуе і як яны могуць модыфікаваць гены з дапамогай сучасных тэхналогій. Кожны дзень адкрываюцца новыя хворобы і іх лячэнне, уключая штуралік RNA-лячэнні, што дае нам веру ў тое, насколькі карысным можа быць гэтая тэхналогія для медицыны.
Існуе багата прынціпав выкарыстання гэтага пратокола. Метад, заснаваны на электрафарэзі, агульна ўважаецца найбуйнейшай і найдзеўнейшай спосабнасцю дастаць улік чаленых колькасцей даўнага RNA. Пасля кваліфікацыі RNA, добрае выдачнае значэнне таксама яўляецца важным фактарам для навукоўцаў, каб падтрымліваць іх навуковыя даследаванні, уключая выпадкі, калі неабходна вялікае колькасці RNA для эксперыментаў з-за вялікага пачатковага матэрыяла. Крім таго, транскрыпцыя in vitro для даўнага RNA звычайна больш дакладная і паўтаральная, чым хімічная сінтэзіруванне ці клеточны сінтэз RNA.
Yaohai BioPharma — гэта адна з топ-10 CDMO, якая спецыялізуецца на пратоколе транскрыпцыі in vitro для даўнага RNA, а таксама на рэгulaтарных справах. У нас ёсць сістэма кіраўніцтва якасцю, якая адпавядае сучасным стандартам GMP і глабальным рэгуляванням. Наша каманда экспертаў па рэгulaтарных пытаннях мае досвед у глабальных рамаках рэгулявання, каб прыśpiesіць вывад біялогічных працяг. Мы забяспечваем чырвонку працэсаў вытвору, якасныя produkты, а таксама дасталеныя з правіламі US FDA і EU EMA. Australia TGA і China NMPA таксама задавольныя. Yaohai BioPharma успяхова працягнула адыт на месцы кваліфікаванага чалавека (QP) Еўрапейскага Саюза для нашай сістэмы якасці GMP і нашага вытворчага аб'екта. Крім таго, мы паспяхова працягнулі першыя сертыфікацыйныя адыты сістэм кіраўніцтва якасцю ISO9001, сістэмы кіраўніцтва асяроддзем ISO14001 і сістэмы кіраўніцтва акупацыйнай далёкасцю і безапаснасцю ISO45001.
Yaohai Bio-Pharma, адна з топ-10 прадуцентав біягалых працэдаў, спецыялізуецца ў мікрабіальнай ферментацыі. Мы стварылі сучасную апаратуру, якая абладае сучаснымі абсталяваннямі і магчымасцю РД-выйрашэння. У нас пяць ліній вытвору дрэўных рэчывінаў, якія адпавядаюць жаданням GMP для мікрабіальнай ферментацыі і чысцення, а таксама дві автоматызаваныя лініі для запаўнення картрыджоў, флаконоў і шприцаў з наперад запаўненымі сірэнямі. Даступныя маштабы ферментацыі размахваюць ад 100L да 500L, 1000L і 2000L. Протакол транскрыпцыі віта for Long RNA для віас уключает 1ml да 25ml, а спецыфікацыі для наперад запаўненых шприцаў і картрыджоў крыяць 1-3ml. Наша праўдзельная масцавая ўдзельніча ў cGMP і гарантуюць стаялы паставы клінічных прыкладак і камercыйных прадуктаў. Наш завод вытворае вялікія малекулы, якія пасылаюцца па ўсём свету.
Yaohai Bio-Pharma мае досвід у выработцы біягалактараў, якія ствараюцца з мікрабіялагічных арганізмаў. Мы прасуем кастамныя рашэнні RD, а таксама сэрвісы па вытворчасці, мінімалізуя патэнцыйныя рыскі. Мы працавалі з рознымі тэхнікамі, такімі як рекамбінацыйныя клетачныя пададзелы, вакцыны (уключна пептыды), факторы росту, гармоны і Працэдура Транскрыпцыі In vitro для Довгага RNA. Мы спецыялісты ў многіх мікрабіялагічных арганізмах, уключаючы выкліканне екстрацелюлярнай і інтраклітарнай секцыі дріжджоў (выход да 15 г/л) і бактэрыяльную інтраклітарную салодкасць, а таксама інклудзіянныя тэла (выход да 10 г/л). Мы таксама развілі платфарму ферментации BSL-2 для стварэння бактэрыяльных вакцин. У нас ёсць гісторыя падзякі, што мы ўдосконалі працэсы вытворчасці, што збялічае выход і зніжае затраты. У нас ёсць вышэйшая тэхналогічная каманда, каб забеспечыць часавае і высокаякаснае выкананне праектаў. Гэта дапамагае нам прывезці вашы незвычайныя праductы на рынак шырэй.
Yaohai Bio-Pharma ёсць лідарам у галіне транскрыпцыі in vitro для CDMO даўняга RNA. Галоўныя напрамкі нашай дзейнасці абмежуюцца вырабам мікрабіальных вакцын і лікаў для лячэння домашніх жывёл, чалавека і ветэрынарнага здароўя. Мы маемо найновейшыя тэхналагічныя платфармы РД і выработкі, якія крыюць усю працэдуру выработкі ад інжынерынга мікрабіальных штамаў, праз банкі ўладнікаў і дызайн метадаў да клінічнай і камерчыскай выработкі, каб забяспечыць паспяховыя рашэнні. Мы накапалі значную колькасць ведаў у галіне біядачных мікрабіальных працэсаў. Успехова завяршана больш за 200 праектаў, і мы дапамагаем нашым кліентам супрацаваць з правіламі, такімі як US FDA і EU EMA. Мы таксама дапамагаем ім арганізаваць Australia TGA і China NMPA. З-за нашага досвіду і экспертызы мы можам швидка адказваць на рыночныя патрабаванні і прapушчаема цягнуць CDMO-услугі.