Ontsluit die Geheimenisse van Hoogkwaliteits Plasmid Ekstraksie

Plasmid-eksaksie is krities belangrik vir navorsers. As genvektore is plasmids lewensbelangrik in vaksynnavorsing en geneterapie, waar kwaliteit tel. Sleutelkwaliteitsfaktore sluit die supergespoelde proporsie en endotoxieninhoud in. Reguleringe wissel: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, met <5% lineêre/oop-sirkulaire DNA. Klante prefereer dikwels ≥95% supergespoeld. Endotoxienvlakke is: navorsing (>50 EU/µg), transfeksie (<50 EU/µg), en endotoxienvry (<0.1 EU/µg).

Supergespoelde Plasmid-DNA

Plasmids van Escherichia coli sluit supergespoelde (SC), oop-sirkulaire (OC), en lineêre (L) DNA in. 'n Hoë SC-proporsie verhoog transfeksie-effektiwiteit en uitdrukking. Byvoorbeeld, 'n 85.45% SC-plasmid se transfeksie is 2.5x hoër, en 'n 93.28% SC-plasmid se HGF-uitdrukking is 1.8x hoër, wat SC-DNA se superioriteit bevestig.

Oop-kringvormige DNA: Wanneer een van die drade van dubbelstrandige DNA breek, word die oorgewonde struktuur losser, wat 'n oop-kringvormige plasmid vorm met 'n groter volume wat die stadigste beweeg tydens elektroforesis en by die top posisioneer is.

Lynêre DNA: Wanneer beide drade van plasmid-DNA breek, ontstaan 'n lynêre struktuur, met 'n relatief kleinere volume wat vinniger beweeg as oop-kringvormige DNA, maar stadiger as oorgewonde DNA, tweede in posisie.

Oorgewonde DNA: Twee helikse wond om mekaar, wat 'n oorgewonde struktuur vorm gebaseer op die DNA-heliks. Dit het die kleinste volume en beweeg die vinnigste tydens elektroforesis, onderstonds geposisioneer.

Kwantitatiewe Analise van Oorgewonde Proporsie

Labs gebruik agarose-gel-elektroforesis (AGE) en Gel-Pro Analyzer om die oorgewonde proporsie deur middel van elektroforesis-beelde te bepaal. Eenbeeld wys 97.539% SC DNA, terwyl 'n anderbeeld 63.833% SC en 36.167% OC DNA wys (lynêre DNA nie sigbaar nie).

Die Geheim van Endotoxine in Plasmids

Endotoxine is 'n komponent van die buitelaaie van Gram-negatiewe bakterieë, wat na bakteriële dood of lysis uitgeskei word, en lipopolysakkaryde A bevat wat toxis is. Tydens plasmid-ekstraksie dring endotoxine die lysaatoplossing in, wat transfeksie-effektiwiteit beïnvloed en nie-spefiese immuunresponsies aktiveer, wat lei tot vals positiewe resultate in eksperimente.

Kwantitatiewe en Kwalitatiewe Analise van Endotoxine

Die Limulus amebosielisaat (LAL)-toets探测 endotoxine deur agglutinasie met 2-keto-3-deoksyoktanoësezuur (KDO) in die lipopolysakkaryde (LPS). Dit is kwalitatief en semi-kwantitatief, wat die teenwoordigheid van endotoxine aandui deur bekragting of kleurverandering wanneer dit met monsters gemeng word.

Yaohai Bio-Pharma bied endotoxien-vry supergekrulde plasmide aan. Outsourcing na Yaohai verhoog transfeksie- en ekspresie-effektiwiteit. Geleverde plasmide het 'n ≥95% SK-proporcie (gemiddeld 85%±10%) en endotoxienvlakke ≤0.1, ≤0.01, of ≤0.005 EU/μg.

Ons soek ook aktief instansiële of individuele wêreldwye partners. Ons bied die mees mededingende vergoeding in die bedryf. As u enige vrae het, aarzel asb nie om ons te kontak nie: [email protected]